bFGF对人晶状体上皮细胞钾氯协同转运体KCC表达的影响及相关机制研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:n19851020
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目的:1、观察碱性成纤维生长因子(bFGF)对人晶状体上皮细胞(HLECs)钾氯协同转运体KCC1、KCC3、KCC4表达的影响。2、探讨MAPK/ERK1/2、PI3K/Akt信号传导通路在bFGF调节晶状体上皮细胞KCC1表达中的作用机制。方法:1、以体外培养的人晶状体上皮细胞株HLE-B3为研究对象,常规培养的细胞作为空白对照组(control组),分别加入不同浓度(1,10,100μg/L)及不同作用时间(6、12、24、48h)的bFGF进行处理,RT-PCR法测定不同浓度及作用时间下人晶状体上皮细胞中KCC1、KCC3、KCC4转录水平的表达变化。2、Western Blot法半定量检测不同浓度(1,10,100μg/L)及不同作用时间(6、12、24、48h)的bFGF对人晶状体上皮细胞KCC1、KCC3、KCC4蛋白表达的影响。3、免疫荧光细胞化学技术观察KCC1蛋白在人晶状体上皮细胞中的分布。4、Western Blot法检测丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK1/2)信号通路抑制剂U0126和三磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002作用于1μg/LbFGF诱导12h的人晶状体上皮细胞增殖过程中KCC1蛋白的表达变化。结果:1、RT-PCR结果示:空白对照组表达少量KCC1、KCC3、KCC4m RNA,不同浓度bFGF处理人晶状体上皮细胞后,1μg/LbFGF处理组KCC1、KCC3、KCC4的表达最强,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),但在bFGF不同干预时间上差异无统计学意义(P>0.05),1μg/L组同其余各浓度组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2、Western Blot检测示:空白对照组表达少量KCC1、KCC3、KCC4蛋白,不同浓度bFGF处理组中KCC1、KCC3、KCC4蛋白表达在1μg/L时量达到峰值,KCC1蛋白当bFGF浓度增加到100μg/L时表达量反而减少,差异具有统计学意义(P<0.05),但各蛋白在bFGF不同干预时间上差异无统计学意义(P>0.05)。1μg/LbFGF组与其余各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3、免疫荧光细胞化学技术示KCC1蛋白表达于人晶状体上皮细胞的除细胞核外的整个胞质中。4、信号通路抑制剂LY294002、U0126与1μg/L bFGF共同孵育人LECs 12h后,显示LY294002+bFGF联合组、U0126+bFGF联合组较单用bFGF组KCC1蛋白的表达明显降低,两者比较差异有显著性统计学意义(P<0.05),而单用LY294002、U0126组与空白对照组相比KCC1蛋白的表达相近,差异无统计学意义(P>0.05),并且bFGF+LY294002联合组KCC1蛋白的表达明显少于bFGF+U0126联合组,比较差异仍有显著性(P=0.002)。结论:1、bFGF能够引起KCC1、KCC3、KCC4在人晶状体上皮细胞中表达增多,并且在1μg/L时对KCC1、KCC3、KCC4的影响达到峰值,此后逐渐下降,但并未出现明显的时间趋势。2、KCC1蛋白主要存在于人晶状体上皮细胞的胞浆中。3、MAPK/ERK1/2、PI3K/Akt信号通路均介导bFGF诱导的人晶状体上皮细胞KCC1表达的调控过程。其中,PI3K/Akt信号通路可能发挥主要作用。
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