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目的: 评价重组人凋亡素2配体(rh-Apo2)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的的免疫原性及其对疗效的潜在影响。 方法: 1.将重组人凋亡素2配体(rh-Apo2L)用包被液稀释成10μg/L,包被96孔板,向各孔加入50μl待检血清样品,同时设阳性和阴性对照孔,各孔加入相应的辣根过氧化物酶标记抗体。终止反应后,在酶标仪上读取各孔450nm处的吸光度(OD)值。以同样本血清用药前OD值2.1倍作为产生抗体的阈值,凡给药后血清标本测得的OD值大于或等于阈值者,判定为阳性。 2.取对数生长期生长良好的肺癌细胞A549,以2.5×104个细胞/mL接种于96孔板,每孔200μL;以相应组别药物分别干预细胞24h、48h后,采用MTT法检测各组细胞生长情况,计算细胞生长抑制率。 3.取对数生长期生长良好的肺癌细胞A549,以7.5x104/mL接种于25mL培养瓶,加培养液至5mL,以相应组别药物分别干预细胞48h后,采用流式细胞仪技术检测计算各组细胞凋亡率的变化。 4.统计学方法:计量资料以均数±标准差(x±s)表示,比较不同组别之间差异性用两因素重复测量资料方差分析或者是单因素方差分析;使用SPSS13.0统计学软件对所获数据进行统计分析,所有结果均以P<0.05表示差异有统计学意义。 结果: 1.ELISA检测结果显示:对照组患者在使用rh-Apo2L/安慰剂前后,均未发现有针对rh-Apo2L的抗体产生;实验组患者在使用rh-Apo2L/安慰剂前,亦均未发现有针对rh-Apo2L的抗体产生。而用药后,2例患者血清中检测到抗rh-Apo2L抗体IgM阳性,3例患者血清中检测到抗rh-Apo2L抗体IgG阳性,1例患者血清中检测到抗rh-Apo2L抗体IgE阳性。另有1例患者在进行药物(rh-ApoL)皮肤过敏试验中结果为阳性。 2.MTT法检测结果显示,TRAIL单药组、TRAIL+阴性血清组、TRAIL+阳性血清(IgM)组、TRAIL+阳性血清(IgG)组各组药物干预24h、48h后,各组均呈现一定程度的细胞抑制与细胞凋亡。但是各组间肺癌细胞A549细胞抑制率与凋亡率相比较,差异均不具有统计学意义(P>0.05)。表明各组的待检血清中均未检测到中和抗体的产生。 3.流式细胞仪检测结果显示:TRAIL单药组、TRAIL+阴性血清组、TRAIL+阳性血清(IgM)组、TRAIL+阳性血清(IgG)组各组干预48h后,均呈现一定程度的细胞凋亡。与空白组组相比,采用单因素方差分析,差异具有统计学意义(P<0.05)。但是,TRAIL单药组、TRAIL+阴性血清组、TRAIL+阳性血清(IgM)组、TRAIL+阳性血清(IgG)组各组间肺癌细胞A549凋亡率相比较,差异不具有统计学意义(P=0.564>0.05)。 结论: 1.rh-Apo2L对人可能具有一定的免疫原性,但是但所检测到的结合抗体不具有中和活性,表明该免疫原性并不会减弱药物的活性以及与活性相关的毒性。 2.少数人体内可能含有针对rh-Apo2L的抗体IgE,所以在使用rh-Apo2L之前应常规行皮肤过敏试验。