GPRC6A在前列腺癌细胞上皮间质转化中的作用研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanghuayejuan
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目的:近年来,前列腺癌(prostate cancer,PCa)逐渐变成威胁我国男性泌尿系统健康的恶性肿瘤之一。在PCa患者中,骨是最常见的转移部位。骨转移也是PCa致死的主要原因。有必要寻找PCa转移的标志物,为PCa转移有效防治开拓新思路和新药物靶点。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transiton,EMT)是肿瘤细胞发生转移重要手段之一。G蛋白偶联受体C家族A成员(G protein-coupled receptor family C group6 member A,GPRC6A)在人类多种组织器官中广泛表达,在能量代谢和性激素调节中发挥重要的作用。GPRC6A在PCa细胞中高表达,并且能够促进PCa进展,但其中具体机制作用还不清楚。本研究拟从细胞和动物水平的出发,探究GPRC6A在PCa转移过程中的作用,探究其对PCa细胞的EMT过程是否具有调控机制,为寻找PCa基因治疗的分子靶点提供新思路。方法:构建GPRC6A过表达的慢病毒载体,感染LNcapC4-2细胞株,并筛选稳定表达克隆;利用构建的细胞系作为研究对象,利用qRT-PCR、western blot以及划痕和transwell实验初步探讨GPRC6A对PCa细胞的EMT相关表型以及转移能力的作用;利用皮下成瘤实验以及免疫组化和western blot,组织验证GPRC6A对EMT因子表达的影响;随后给予TGFβ1刺激,分别利用western blot和免疫荧光技术从蛋白水平检测GPRC6A及EMT相关分子的表达,同时利用transwell实验检测GPRC6A介导TGFβ1诱导的细胞转移的作用,探讨GPRC6A在PCa细胞EMT中的作用。结果:成功构建GPRC6A过表达的LNcapC4-2细胞株,GPRC6A过表达能够增加PCa细胞LNcapC4-2的转移能力,同时改变EMT相关表型;皮下成瘤实验提示,GPRC6A能够促进成瘤,伴随着EMT相关因子表达的改变;TGFβ1诱导后,不引起明显细胞形态改变,但改变其EMT相关因子E-cad表达,并促进细胞转移,同时GPRC6A能够加剧这种改变。结论:GPRC6A可能是一个新的PCa转移促进因子,能够促进PCa细胞EMT进程进而影响PCa的发生发展。
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