小麦甲硫氨酸亚砜还原酶A家庭基因分子鉴定与生理功能研究

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通过分析本实验室构建的小麦渐渗系耐盐新品种山融3号(SR3)的抗盐芯片数据中发现MsrA家族可能参与了抗逆响应。在水稻和拟南芥中,MsrA家族基因已有相关功能研究,但在小麦中没有报道。利用已报道的拟南芥和水稻MsrA序列,通过Blast比对EST数据库,将EST序列用Phrap工具拼接得到了3个MsrA基因序列,设计引物后从SR3的cDNA文库和cDNA中克隆到4个MsrA基因,从中国春中克隆了1个不同的MsrA。对这5个TaMsrA序列进行比对和序列分析显示,均具有MsrA保守结构域,分属于3个不同的亚家族,命名为TaMsrA2、TaMsrA4.1、TaMsrA4.2、TaMsrA5.1、TaMsrA5.2。序列分析还显示,小麦的MsrA基因与水稻同源基因相似度较大,分别为82.9%、79.1%、78.3%、78.4%和75.3%,所有的TaMsrA具有类似GCFWG的保守序列,但不同亚家族保守序列会有差异。使用洋葱表皮进行亚细胞定位实验,结果显示TaMsrA2定位于细胞质基质中,TaMsrA4.1定位于质体中,TaMsrA5.1可能属于分泌型蛋白。组织表达模式分析显示,TaMsrA2在小麦根、茎、叶和幼叶中均有表达,且随着植株的发育表达量逐渐降低;TaMsrA4.1在茎和叶等绿色器官中表达量大,在根中表达量较小。将TaMsrA2和TaMsrA4.1转入拟南芥中,并获得过表达株系。拟南芥根长实验显示,TaMsrA2的过表达株系在H2O2处理下与野生型相比表现出了明显的根长优势;TaMsrA4.1的过表达株系在NaCl处理下与野生型相比根长优势显著。此外,用甲基紫精(MV)喷洒拟南芥,TaMsrA4.1的过表达株系与野生型拟南芥相比表现出更强的抗性。研究结果表明了TaMSrA2和TaMSrA4.1生过表达株系中增强了拟南芥对相关非生物胁迫的抗性。使用pET表达体系对TaMsrA2和TaMsrA4.1进行原核表达,尽管尚未获得目的融合蛋白,但是mRNA复杂的二级结构表明其表达调控可能更复杂且精细。本研究初步证明了TaMsrA2和TaMsrA4.1在耐逆方面的功能,这将为深入理解小麦耐逆的分子基础和小麦耐逆育种提供重要的实验证据。
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