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布鲁氏菌病是一种危害严重的人兽共患病,在世界范围内广泛流行。我国布鲁氏菌病主要的诊断方法为细菌分离培养和血清学检测(虎红平板凝集和试管凝集试验),但满足不了快速检测的要求。本论文开展布鲁氏菌快速检测方法的研究,从血清学抗体筛查→阳性样品的病原学检测→病原的分型鉴定,建立系列的检测方法,为布鲁氏菌病净化检疫,提供快速有效地手段。1.建立胶体金试纸检测方法,适用于现场检测。根据双抗原夹心法测抗体的原理,用葡萄球菌蛋白A和布鲁氏菌重组蛋白bp26抗原建立检测布鲁氏菌抗体的胶体金免疫层析试纸条。特异性试验结果表明,阳性和阴性血清检测结果正确,说明该方法特异性较好。试纸条保质期为4℃保存6个月。2.建立荧光定量PCR检测方法,适用于检测病原。以布鲁氏菌属OMP10保守片段为靶基因,设计特异性引物和Taqman荧光探针。将OMP10基因片段克隆到pMD19-T载体,提取质粒,制备标准品及标准曲线。特异性分析结果显示,对照菌株均未出现荧光信号,说明该方法特异性较好；灵敏性分析表明,该方法最低检出数量级为为10-4ng/μL:标准质粒的稳定性试验结果表明,在不同检测时间、不同反应管之间的域值的变化很小,组内组间变异系数均小于2%。3.建立布鲁氏菌分型多重PCR方法,适用于病原进行分型。根据布鲁氏菌基因组多拷贝插入元件IS711及其下游多态位点,设计布鲁氏菌牛、羊、猪种分型引物,优化PCR反应体系和条件,建立布鲁氏菌分型的多重PCR方法。特异性分析结果显示,对照菌株未见扩增,说明该方法特异性较好。灵敏性分析表明,其最低检出数量级为10-2ng/μL.