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脂联素（Adiponectin，ADPN）是一种脂肪组织分泌的血浆高浓度细胞因子，在提高胰岛素敏感性和对代谢紊乱的良性调控方面发挥重要的作用，尤其是对肝脏脂代谢的调节。然而，ADPN调节奶牛肝细胞脂代谢的机制还不清楚。因此，本文以体外分离培养的犊牛肝细胞为模型，就ADPN通过AMPK信号通路调控奶牛肝细胞脂代谢的相关机制进行了研究，进一步了解ADPN调节奶牛肝细胞脂代谢的信号通路。首先我们进行了时间梯度实验以确定ADPN最佳作用时间。将体外原代培养的犊牛肝细胞与一定浓度的ADPN共同孵育培养0h、2h、4h、8h、12h和24h，结果显示ADPN作用4h后，两种ADPN受体（AdipoR1和AdipoR2）的蛋白表达量和p-AMPKα/AMPKα比率同时达到最大值。说明ADPN作用4h后，其所能结合的AdipoR1和AdipoR2的数量为最大，而且ADPN结合受体后，可能在非常短的时间内激活AMPKα的磷酸化。设不同浓度的ADPN和AMPKα抑制剂BML-275组合，共可分为12组：对照组（0ng/mLADPN, GC）、低剂量组（16ng/mLADPN, GL）、中剂量组（64ng/mLADPN, GM）和高剂量组（128ng/mL ADPN, GH）、AMPKα抑制剂BML组（10μmol/L BML-275, BML）和BML+ADPN组（10μmol/L BML-275+64ng/mLADPN, BML+ADPN）。分别孵育4h和8h，收取mRNA、总蛋白以及核蛋白样品，对相应的各项指标进行测定。结果显示，ADPN孵育4h后，显著促进AdipoR1和AdipoR2的mRNA和蛋白水平的表达，BML对二者的表达较GC没有显著性差异，而ADPN激活两种受体，对AdipoR2的作用高于AdipoR1。以上结果表明，ADPN促进AdipoR1和AdipoR2的表达，而BML对它们的表达基本没有影响，提示ADPN在肝脏中的功能是通过AdipoR1和AdipoR2（主要是AdipoR2）来实现的。而且，ADPN作用也可使AMPKα的磷酸化和酶活性表现出上升趋势，而BML组AMPKα的磷酸化和酶活性明显下降。表明BML对AMPKα磷酸化的抑制作用明显，而ADPN对AMPKα的作用不仅可以抵消BML对其磷酸化的抑制作用，相反还有一定程度的促进作用。此外，PPARα的mRNA、蛋白表达量及其转录活性都随加入ADPN浓度的增大而增加，但BML对其有明显抑制作用，BML+ADPN组的表达水平显著高于BML却低于GM。与此同时，PPARα的下游靶基因，ACO、CPT-1、CPT-2、L-FABP和ACSL-1等mRNA水平也表现出相似的变化趋势。相反，在ADPN的作用下，SREBP-1c和ChREBP的表达水平和转录活性及其靶基因ACCα、SCD-1、FAS、ApoB100、ApoE和MTP表现出与PPARα及其靶基因完全相反的改变。此外，甘油三酯（TG）和极低密度脂蛋白（VLDL）含量在ADPN作用组中显著降低。以上结果表明，ADPN可以通过激活奶牛肝细胞PPARα、SREBP-1c和ChREBP三个转录因子并促进或抑制其下游靶基因的表达来调节肝脂代谢，三者均为AMPKα的下游调节基因。而ADPN孵育8h后，上述转录因子及它们靶基因mRNA水平的升高或降低不仅继续保持，还在一定程度上得到加强。综上所述，ADPN可以通过激活AMPKα下游的PPARα、SREBP-1c和ChREBP和它们靶基因，增强肝细胞脂氧化作用，抑制脂肪酸合成和转运过程，降低TG和VLDL水平，从而减少肝脂聚积。