巢湖两个入湖河口沉积物氨氧化古菌群落结构时空差异的分子生态学研究

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氨氧化古菌(AOA)在硝化作用的氨氧化过程中起重要作用,对因大量人为氮排放造成富营养化河口、湖泊以及近海生态系统的修复作用具有重要意义。然而,目前对淡水湖泊生态系统,尤其是其河口沉积物中氨氧化古菌群落结构的研究还不够深入。本文在2010年3、6、9和12月期间,以流入巢湖的南淝河和新河入湖河口为对象,主要利用微生物分子生态学技术和分析方法,比较研究这两个河口沉积物中氨氧化古菌群落的分子多样性、群落结构和丰度的时空差异,并对其与沉积物环境因子之间的关系进行了相关分析。主要结果如下:   (1)就同一河口来说,沉积物的理化参数都具有明显的季节性变化,但是表现规律不相同,如pH值在12月份最低,并明显低于其它3个月份;NH4+-N、NO2-N、NO3-N和OrgN含量则在9和12月份含量较低,而在3和6月份含量较高。就同一月份来说,两个河口之间的沉积物温度和pH值相差不大,但是NH4+-N、NO3-N和OrgN含量均存在差异一。   (2)利用PCR-RFLP对两个河口4个月份采集的沉积物样品进行amoA基因的分子多态性分析,结果共获得24个OTU,其中的3个仅属于南淝河,10个仅属于新河,而11个属于两个河口共有。   (3)对于AOA群落多样性指数(H和S)和丰度指数(SChao1)来说,两个河口在一年内呈现相同的变化趋势,即H和S最大值和最小值分别出现在6月份与12月份;在同一月份内,两个河口的多样性指数与丰度指数存在差异,即在3和12月份,南淝河河口的H、S和SChao1均大于新河河口,而在6和9月份则与之相反。   (4)PCoA分析结果表明,南淝河河口3、6和9月份的沉积物样品中AOA群落聚在一起成为独立的一组,新河河口6和9月份以及南淝河河口12月份样品的AOA群落聚集成为另外一组,同时新河河口3和12月份的各自独立成为一组   (5)群落结构相似性分析得出,南淝河河口沉积物中各个月份间的种群重合度(Jabund)在0.43-0.81之间,而新河的值在0.17-0.58之间;而同一月份两个河口的AOA种群重合度在0.31-1.00之间。   (6)BLASTn比对分析得出,南淝河与新河河口沉积物中的AOA种群主要与来自农业土壤、淡水河流和湖泊沉积物中的AOA同源性较强,而两个河口也存在一些特有的AOA种群。系统进化树分析结果表明,两个河口的24个OTU归属于6个分支(cluster),其中clusterD仪包含一个来自新河河口的OTU,而其它分支所包含的OUT均来自两个河口。   (6)qPCR分析结果表明,在一年内两个河口沉积物的古菌amoA基因拷贝数存在较大差异,即南淝河在6月份最低,为4.29×106个/g沉积物,12月份最高,为7.26×107个/g沉积物;而对新河来说,从3月份最低的9.53×105个/g沉积物升至12月份最高的2.24×107个/g沉积物。   (7)CCA分析得出,两个河口沉积物的温度,NH4+-N和NO2-N浓度对AOA群落多样性及种群分布有很大影响;斯皮尔曼秩相关系数的结果显示,沉积物中TN和OrgN含量对AOA丰度影响显著。
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