链格孢属真菌现代分类方法研究

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链格孢是半知菌暗色丝孢菌中重要的一类真菌,该属真菌种类多,寄主范围和地理分布广泛。95%以上的种能兼性寄生在植物上,是重要的植物病原菌。有些种是人和动物的条件致病菌,引起多种疾病。有些种可用作杀菌剂、除草剂等,是有应用潜力的生物资源。因此链格孢的正确分类鉴定具有重要的理论和实践意义。然而由于该属真菌受环境条件或培养条件的影响,分生孢子的形态变异幅度较大,仅依靠表形特征为依据的传统分类方法已不能满足需要,必须探索其它分类方法来弥补传统分类的不足。许多研究者从很多方面研究了链格孢的种级分类标准,但是目前在多种分类方法所得到的结论,及这些方法在链格孢种级分类中的作用等方面存在一些争议和混乱,这些现象给链格孢的发展和交流,及应用研究带来了很大影响。本研究的目的就是从传统形态学、生物化学、分子生物学、植物病理学等方面探索一套简便易行的分类方法,以解决目前链格孢分类上存在的一些问题。首先从全国20多个省、自治区、直辖市实地采集近2000份标本,加本实验室、标本室保存的标本共计5000余份,经保湿培养,获得近250个菌株。以分生孢子形态及产孢表型特征为主要分类依据,共描述鉴定链格孢44种,其中,新种7个,新组合1个,中国新记录种5个(见附录),补充描述中国已报道种29个,不确定种2个。蛋白质是基因表达的直接产物,蛋白图谱所表现的构形、净电荷及分子量的不同反映了物种之间的不同。为了从蛋白质水平检测链格孢种间的差异,我们在审慎的形态学鉴定基础上,选用15个菌株进行可溶性蛋白凝胶电泳分析,21个菌株进行酯酶同工酶分析。结果显示,不同种间可溶性蛋白图谱的带型具多型性,种内菌株间的带型具相似性。不同种间的酯酶同工酶带型具多型性,种内菌株间带形基本一致。聚类分析都得到了和形态鉴定一致的结果。表形性状的差异最终是由基因型决定的。RAPD技术用随机引物对整个基因组DNA进行扩增,具有极大的丰富性和探测性。我们用筛选出的9个随机引物对57个链格孢菌的基因组DNA进行RAPD分析,共得到142个多态性带,平均每个引物15.8条带。聚类结果显示,大孢子种和小孢子种能明确区分成两组,小孢子种在42%的相似系数处,
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