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目的:本研究通过检测孕激素和脂联素分子受体3(Progestin and adipoQ receptor 3,PAQR3)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达水平,分析其潜在的临床价值。构建上调和下调PAQR3表达的NSCLC稳转细胞模型以探究其在NSCLC进展中的功能和可能调节机制,旨在寻找新型的治疗靶点,以提高NSCLC患者的生存质量和远期预后。方法:1.临床意义分析:在UALCAN数据库中分析NSCLC中PAQR3 mRNA表达水平,探究其表达水平与NSCLC患者临床病理学特征之间的相关性。收取遵义医科大学附属医院胸外科60例NSCLC患者的癌组织及其癌旁5cm处正常肺组织,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western-Blot,WB)检测NSCLC患者的癌组织和配对癌旁正常肺组织中PAQR3 mRNA和蛋白表达水平。对60例NSCLC患者的临床资料进行整理,分析PAQR3 mRNA与NSCLC患者临床病理学特征之间的关系。结合PrognoScan和Kaplan-Meier Plotter数据库分析PAQR3 mRNA表达水平与NSCLC患者预后之间的相关性。2.体外功能研究:选取NSCLC A549和H1299细胞,采用慢病毒构建上调和干扰PAQR3基因表达的NSCLC稳转细胞株。分组:慢病毒过表达对照组(Vector)vs上调PAQR3基因表达组(PAQR3-OV);干扰对照组(Si-NC)vs干扰PAQR3基因表达组(Si-PAQR3)。慢病毒转染NSCLC细胞24h时在荧光显微镜下观察转染效率,达到预期转染效率后更换不含慢病毒和嘌呤霉素的RPMI-1640完全培养液继续培养。在细胞传代时加入含嘌呤霉素(A549:2μmol/L和H1299:4μmol/L)的RPMI-1640完全培养液培养A549和H1299细胞筛选稳定细胞株。通过qRT-PCR和Western-Blot技术检测稳转细胞株中PAQR3表达水平明确模型是否构建成功。采用CCK-8、克隆形成实验和流式细胞术探究PAQR3对A549和H1299细胞增殖、克隆形成、周期和凋亡的影响。3.机制研究:在癌细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)中下载肺癌细胞基因表达数据,通过基因富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)PAQR3可能参与调节肺癌进展的机制。在已构建好的NSCLC A549和H1299稳转细胞株中,采取Western-Blot检测NF-κB(p65)、p53、p-p53和Bax蛋白的表达。结果:1.在UALCAN数据库NSCLC组织中PAQR3 mRNA表达水平明显升高,PAQR3 mRNA表达水平与NSCLC患者的组织学亚型和淋巴结转移相关(P<0.05)。然而,在60例临床NSCLC组织中PAQR3 mRNA和蛋白表达水平明显下降。PAQR3mRNA表达水平与NSCLC患者的肿瘤大小相关(P<0.05)。在PrognoScan和Kaplan-Meier Plotter数据库中发现上调PAQR3表达的肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者有更好的预后。2.体外功能研究发现,与慢病毒过表达对照组(Vector)相比,上调PAQR3基因表达水平明显可抑制NSCLC细胞增殖和克隆形成,阻碍细胞周期转变,并诱导细胞凋亡;相反,干扰PAQR3基因表达水平明显促进了NSCLC细胞增殖和克隆形成,促使细胞周期G1向S期转变,减少NSCLC细胞凋亡,差异均具有统计学意义(P<0.05)。3.GSEA发现PAQR3可能参与调节肺癌细胞周期、DNA复制、p53信号通路等信号通路。上调A549细胞中PAQR3表达可抑制NF-κB(p65)蛋白表达,促进p53蛋白、p53磷酸化及Bax蛋白表达水平升高。上调H1299细胞中PAQR3表达可抑制NF-κB蛋白表达,促进Bax蛋白表达,但对p53蛋白和p53磷酸化表达水平无影响。相反,干扰A549细胞中PAQR3表达可促进NF-κB蛋白表达,同时抑制p53蛋白、p53磷酸化及Bax蛋白表达水平。干扰H1299细胞中PAQR3表达可增强NF-κB蛋白表达,抑制Bax蛋白表达。结论:1.PAQR3 mRNA和蛋白在NSCLC组织中表达下降。PAQR3表达水平与NSCLC患者肿瘤大小相关,升高PAQR3 mRNA表达的LUAD患者倾向于更好的预后。2.PAQR3可能通过NF-κB/p53/Bax信号通路抑制NSCLC细胞生长。