目的: 一.对人鼻中隔软骨细胞培养法进行改良并观察改良法培养的人鼻中隔软骨细胞的生物学特性,为软骨组织工程提供更多高活性的种子细胞。 二.观察甲壳胺无纺布在体外、体内降解性能和规律及其生物相容性,探讨其作为软骨组织工程细胞支架的可行性。 三.探讨一种新型聚合物支架制作方法,即制作力学性能、可塑性、三维结构良好的以聚丙交酯-乙交酯共聚物Poly(dl-lactide-co-glycolide)(PLGA)包埋甲壳胺无纺布的新型支架,使之符合中空管状喉、气管组织工程软骨构建的特殊要求。 四.研究以PLGA包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,在有免疫力的动物体内构建内衬上皮的管状组织工程软骨的可行性。 方法: 一.采用改良法(即软骨细胞悬液和软骨块共同培养法)体外培养人鼻中隔软骨细胞,对其进行倒置相差显微镜动态观察、甲苯胺蓝异染和Ⅱ型胶原的免疫组化染色,并测定35S-Na2S04掺入量以观察软骨细胞蛋白多糖合成量,在细胞表型和功能方面进行鉴定并与常规法(即单纯细胞悬液培养法)比较。 二.将甲壳胺无纺布称重后分组置于1%溶菌酶和0.1%溶菌酶溶液中,37℃恒温震荡水浴,按时间顺序取出80℃烘干4h后称重,观察其体外降解速度;将其植入兔皮下,分别于2、4、8、12周取材进行大体观察和HE染色光镜检查。 三.将2倍甲壳胺无纺布质量的PLGA溶解于氯仿中,聚合物浓度为2%,将甲壳胺无纺布反复浸泡其中、烘干,直至均匀交联。所制作的支架,测定其力学性能及孔隙率。