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本文研究鼻咽癌中存有肿瘤干细胞的可能性,初步探讨鼻咽癌肿瘤干细胞的表面标志物,为针对杀灭肿瘤干细胞的治疗方法在鼻咽癌临床治疗中的应用提供依据。
[方法]
采用免疫组化SP法检测19例鼻咽粘膜慢性炎、33例鼻咽癌和28例鼻咽癌淋巴结转移组织中E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表达,检测各指标在鼻咽癌的发生发展和转移灶中的表达及其差异;采用原位杂交方法检测EB病毒小分子RNAEBERs在鼻咽癌、鼻咽癌癌旁组织中的表达;体外培养人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z,平板克隆形成率实验观察CNE-2Z细胞生长增殖的情况;原代培养鼻咽癌组织,观察鼻咽癌细胞在体外生长增殖能力,采用免疫细胞化学检测鼻咽癌原代细胞以及CNE-2Z细胞中E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表达;复制CNE-2Z裸鼠移植瘤模型,采用免疫组化SP法观察以上指标在移植瘤组织中的表达情况;采用原位杂交方法检测EBERs在CNE-2Z细胞及其裸鼠移植瘤组织中的表达;通过对比各个指标在鼻咽癌组织、鼻咽癌原代细胞、人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z以及裸鼠移植瘤组织中的表达情况,初步探讨各指标在鼻咽癌发生发展中的作用以及能否成为鼻咽癌肿瘤干细胞的表面标志物。
[结果]
(1)临床标本免疫组化结果:E-cadherin和CD44H在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性率分别为100%(19/19)和10.52%(2/19),在鼻咽癌中的阳性率分别为54.54%(18/33)和75.76%(25/33),在鼻咽癌淋巴结转移灶中的阳性率分别为25.00%(7/28)和96.43%(27/28);β-catenin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和鼻咽癌淋巴结转移灶中异常表达率分别为为10.53%(2/19)、48.48%(16/33)和78.56%(22/28);E-cadherin、CD44H在鼻咽癌中的表达与鼻咽粘膜慢性炎组以及鼻咽癌淋巴结转移组比较差异均有极显著性(P<0.001);β-catenin在鼻咽癌中的异常表达与鼻咽粘膜慢性炎组及鼻咽癌淋巴结转移组比较差异均有显著性(P<0.05);E-cadherin表达缺失与β-catenin异常表达呈正相关(r=0.55,P=0.006)。
(2)临床标本原位杂交结果:EBERs在38例鼻咽癌癌旁组织中阳性率为0%(0/38),在鼻咽癌中阳性率为84.21%(32/38),差异有极显著性(P<0.001)。
(3)CNE-2Z细胞有着极强的克隆形成和成瘤能力,其平板克隆形成率为(71.88±4.52)%,裸鼠移植瘤成功率为100%;在33例鼻咽癌中,E-cadherin、CD44H和β-catenin均为异质性表达;在CNE-2Z中,E-cadherin为异质性表达,而CD44H和β-catenin阳性表达率均为100%,呈同质性表达;在裸鼠移植瘤组织中三者亦均为异质性表达;EBERs在CNE-2Z细胞及其裸鼠移植瘤组织中均为阴性表达。
(4)鼻咽癌原代培养结果:采用组织块培养法对15例鼻咽癌新鲜组织进行原代培养,14例有癌细胞长出,随着培养时间的推移,细胞数量逐渐减少,最后仅剩余极少量细胞存活,其中5例癌细胞长满瓶壁,对其消化传代后,癌细胞逐渐死亡,一例可见一个克隆形成。本实验初步表明鼻咽癌中除了一小部分细胞外,绝大部分细胞不能在体外长期存活生长,这一小部分细胞可能对鼻咽癌的发生发展有着及其重要的作用。
[结论]
(1)CD44H呈高表达,E-cadherin为低表达,β-catenin膜表达减弱或缺失,胞浆/核表达增多。CD44H高表达、β-catenin异常表达及E-cadherin的低表达可能对鼻咽癌的生长、增殖和转移起着重要的调控作用。β-catenin异常表达可能与E-cadherin表达缺失有关。
(2)EB病毒小分子RNA(EBERs)在鼻咽癌的发生发展过程中起着重要作用,但并不是鼻咽癌发生的必须条件。
(3)原代培养表明鼻咽癌中存在肿瘤干细胞,这部分细胞可能对鼻咽癌的发生发展起着重要的作用。
(4)平板克隆形成率、裸鼠移植和免疫化学实验提示人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z内CD44H+的细胞有着极强的增殖能力和成瘤能力,在裸鼠移植瘤内,CD44H+细胞可以分化产生CD44H-和CD44H+细胞,CD44H+细胞可能含有丰富的鼻咽癌干细胞,CD44H可能成为鼻咽癌干细胞的表面标志。
(5)研究针对肿瘤干细胞的治疗方法在临床上是可行的。