【摘 要】
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目的:用酶消化法体外培养人神经母细胞瘤(Neuroblastoma, NB)细胞系,用神经特异烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验鉴定细胞。建立人NB裸鼠荷瘤模型及转移模型。检测荷瘤鼠原发
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目的:用酶消化法体外培养人神经母细胞瘤(Neuroblastoma, NB)细胞系,用神经特异烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验鉴定细胞。建立人NB裸鼠荷瘤模型及转移模型。检测荷瘤鼠原发瘤与转移瘤中miRNA的表达差异情况,探讨异常表达的miRNA参与NB发生侵袭和转移的可能分子机制。方法:取NB病人的新鲜标本,通过消化培养法培养细胞;将细胞进行分离与纯化,建立细胞系。采用细胞形态学、NSE免疫组化染色、软琼脂单克隆形成实验进行检测鉴定。取对数生长期瘤细胞悬液接种于裸小鼠右侧后肢胁腹部皮下,观察荷瘤生物学特性,进行病理组织学检查及基因芯片分析。提取原发瘤和转移瘤总RNA和小分子RNA,在miRNA微阵列芯片中杂交检测,通过芯片扫描和数据分析并通过实时荧光定量RT-PCR验证,获得NB原发瘤与转移瘤异常miRNAs表达谱。结果:建立的NB细胞系细胞呈小梭形,部分呈泪滴状,少数呈三角形,这种为幼稚型细胞,有些细胞胞浆突起延长,视为成熟型细胞。NSE染色及软琼脂克隆形成实验证实所培养细胞为NB细胞。48例接种裸鼠中共有36例荷瘤成功,总荷瘤率75%;10例发生转移,转移率21%。筛选出54个可能与NB侵袭和转移的相关的miRNAs,表达上调35个,表达下调19个。其中miR-483-3p、miR-99b、miR-145、miR-602、miR-26b、miR-125a-3p、let-7f在NB原发瘤与转移瘤中表达具有显著差异结论:成功建成NB细胞系及人NB裸鼠局部荷瘤及转移瘤模型,较好地模拟了人NB自然生长和局部浸润及远处转移过程,是NB体内研究的理想动物模型。证明NB肿瘤具有异质性,这可能是NB转移的重要原因;筛选出的显著表达差异的miRNAs在NB的侵袭和转移过程中可能发挥着重要作用,为研究NB的转移和治疗提供新的靶点。
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