论文部分内容阅读
目的:探索mi R-103a-3p对胰腺癌的增殖、侵袭及转移的影响,为了解miR-103a-3p影响胰腺癌发生、发展的作用机制提供理论研究依据,同时为胰腺癌的生物学诊断和分子靶向治疗提供新的依据和方法。方法:(1)采用课题组前期已构建好的miR-103a-3p低表达的慢病毒载体、阴性对照慢病毒,分别感染PANC-1胰腺癌细胞株;(2)qRT-PCR检测两组细胞miR-103a-3p的相对表达量;(3)两组胰腺癌细胞株分别注射于两组裸鼠皮下,每组5只,构建裸鼠皮下瘤体模型;(4)再将两组胰腺癌细胞株分别注射于两组裸鼠胰腺被膜下,每组5只,构建裸鼠胰腺被膜下瘤体模型;(5)比较两组裸鼠皮下瘤体形成时间、大小、重量,肉眼观察并连续切片HE染色比较两组胰腺被膜下胰腺癌模型裸鼠肝、肺转移情况;(6)皮下瘤及胰腺被膜下原位瘤HE染色、免疫组化进行病理学检测。结果:(1)成功获得mi R-103a-3p低表达的胰腺癌细胞株(control-PANC-1组)、转染了空病毒的胰腺癌细胞株(NC-PANC-1组),且感染荧光表达率约为80%;(2)用qRT-PCR测定两组细胞miR-103a-3p表达量,以control-PANC-1组作为对照组,NC-PANC-1组细胞miR-103a-3p相对表达量为(1.799±0.056),control-PANC-1组miR-103a-3表达量为(1.002±0.072),与NC-PANC-1组比较,control-PANC-1组miR-103a-3p表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.01);(3)裸鼠皮下成瘤情况:NC-PANC-1组、control-PANC-1组裸鼠分别于注射后第4天、第6天皮下可见米粒大小结节,此后观察NC-PANC-1组裸鼠皮下结节生长相对迅速,第1、2、3、4、5、6周测得平均体积为98mm~3、210mm~3、305mm~3、458mm~3、707mm~3、824mm~3,而control-PANC-1组裸鼠皮下结节每周测得平均体积为32mm~3、53mm~3、124mm~3、298mm~3、406mm~3、438mm~3。6周处死后裸鼠瘤体称重:NC-PANC-1组平均瘤体重量为3.25±0.16g,control-PANC-1组平均瘤体重量为1.88±0.06g,其差异明显,具有统计学意义(P<0.01);(4)裸鼠胰腺被膜下成瘤后肝肺转移情况:所有裸鼠出现胰腺被膜下结节。肉眼观察NC-PANC-1组中发现2只裸鼠肝脏转移瘤,而control-PANC-1组裸鼠均未发现。control-PANC-1组裸鼠所有裸鼠均未出现肺脏转移,NC-PANC-1组发现1只裸鼠肺脏转移瘤;(5)病理学检测:皮下瘤及胰腺被膜下种植瘤HE染色发现核大深染癌细胞团,证实瘤体存在,表明皮下种植、胰腺被膜下种植成功。胰腺被膜下成瘤裸鼠的肝肺脏组织连续切片HE染色证实NC-PANC-1组出现2只裸鼠肝脏转移瘤、1只裸鼠肺脏转移瘤,而control-PANC-1组均未发现,免疫组化结果提示:control-PANC-1组裸鼠皮下瘤及胰腺被膜下原位瘤Dicer1蛋白表达明显高于NC-PANC-1组。结论:下调miR-103a-3p基因表达的PANC-1细胞,注射裸鼠皮下及裸鼠胰腺被膜下,可阻碍肿瘤生长及抑制肿瘤的肝、肺转移。