农杆菌介导的玉米优良自交系遗传转化研究及成熟胚再生系统的建立

来源 :中国科学院研究生院(上海生命科学研究院) | 被引量 : 26次 | 上传用户:a328623784
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
玉米是重要的粮食作物和饲料作物,建立农杆菌介导的优良玉米自交系的遗传转化体系,对玉米基因工程育种具有十分重大的意义。本研究以 4 个玉米优良自交系9046,齐 319,414,Mo17 的幼胚为材料,详细研究了影响农杆菌介导玉米转化的各种因素,建立了优良自交系的遗传转化体系。研究结果表明,1.0-2.0 mm 的幼胚是最适宜的转化受体;超毒力菌株EHA105比LBA4404和GV3101具有更强的侵染力;在感染液和共培养基中都加入乙酰丁香酮(200μmol/L)和抗坏血酸(50mg/L),在感染液中添加表面活性剂(0.1% Tween20),能显著提高转化效率;合适的菌液浓度(OD600=0.8) 染时间(20 min)、共培养时间(3 d)、较低共培养温度(22℃) 、浸 、较酸的共培养基(pH5.4)均有利于提高T-DNA转移效率。感染前将幼胚高渗透压预处理未能提高转化率;延迟筛选有利于提高抗性愈伤组织的存活率和分化率。应用这个转化体系,获得了供试的4个自交系的42株转基因植株,PCR阳性植株率为2.35%-5.26%。分子检测表明,T-DNA 上的外源基因已经稳定整合进了玉米基因组并得到表达。转基因植株后代(T1代)的遗传分析表明,外源基因在后代中呈孟德尔遗传分离。这一体系的建立,为进一步将有用基因导入玉米优良自交系奠定了基础。 幼胚是目前遗传转化中应用最多的外植体,然而,幼胚作为外植体,取材受到地理条件、季节和发育阶段的严格限制。相比之下,成熟胚取材方便,不受时间和数量的限制,是一种较理想的再生体系。然而,成熟胚被认为是更玩拗,难于再生的外植体。本研究以7个玉米优良自交系为材料,研究了影响成熟胚再生的各种因素,建立了成熟胚高频植株再生体系。研究表明,高浓度的 2,4-D(4.0 mg/L)是诱导愈伤组织必须的;在继代培养基中添加适量的2,4-D(2.0mg/L),BA(0.2mg/L)和硝酸银(10 mg/L)显著增加胚性愈伤组织的形成;在分化培养基中添加0.5 mg/L BA有利于提高发愈伤组织分化频率。应用这个再生体系,7个自交系的成熟胚均得到再生植株,频率为19.8-32.4%。这个体系的建立,为进一步建立以成熟胚为受体系统的遗传转化体系奠定了基础。
其他文献
在极限运算中,学生经常提出这个问题。在一般高等数学的教科书中,对这个问题的回答都是:由对数函数的连续性而得。由于y=ln(1+x)<sup>1/x</sup>不是基本初等函数,而是幂指函数
分析我国农村经济发展历程,发现农村金融、财政支农在其中扮演了非常重要的角色。基于此,在我国政府大力推动社会主义新农村建设和发展之际,应当正确认识农村金融、财政支农
文〔1〕将牛顿——莱布尼兹公式进行了推广,本文进一步推广为:定理设函数f(x)在〔a,b〕上连续,并且 f_+′(x)与 f_-′(x)在(a,b)内存在,如果存在 p、q≥0,满足 p+q=1,使得函
随着教育现代化的发展,新型高科技教育装备层出不穷。近几年,大量的高新技术设备不断地被引入校园,进入课堂,在教学过程中发挥着越来越重要的作用。那么如何管理,如何有效、
目前深度报道已成为各新闻媒体普遍采用的报道形式,不仅是报纸辟出大量篇幅刊登深度报道,而且从中央到地方的各级电视台也开办了《新闻调查》等深度报道专栏。深度报道在新闻
人类即将迈入21世纪。21世纪将是一个既充满发展机遇,又面临严峻挑战的新世纪。我国是世界上最大的农业大国。以占世界7%的耕地养育着占世界22%的人口,如何在21世纪实现农业的
习近平总书记强调,中国要坚持不懈地推进教育信息化,通过教育信息化,大力促进教育公平,提高教育质量。李克强总理也要求要运用现代信息技术,让贫困地区和农村的孩子们,共享优质的教
膝骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病。被认为是全球发病率最常见的一种疾病。年龄、肥胖、炎症、创伤及遗传因素等可
文章通过对王向远<比较文学学科新论>专著的辩析,其中对该文以详实的材料、独立的观点提出了自己的看法,尤其是对该文厘清文学史真相,敢于在权威定义面前说"不"的较真表示了
萧山湘湖兴筑于北宋政和二年(1112年),湖周八十余里,占地三万七千零二亩,用以灌溉浙江萧山由化等乡之田十四万六千八百六十八亩。湘湖建成后,潦蓄旱灌,利及九乡。宋元以来,江