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背景:川崎病(Kawasaki disease,KD)又名皮肤黏膜淋巴结综合征,是一种病因不明确的免疫介导的全身性中小血管炎,其引发的冠状动脉损伤(coronary artery lesions,CALs)是儿童后天性心脏病的主要原因之一。既往研究认为,免疫失衡及瀑布式炎症反应与KD发病密切相关。IL-35为IL-12家族成员最新成员,作为抑制炎症和免疫的因子参与抑制多种炎症和免疫性疾病的进展。本研究的目的为探讨IL-35在KD患儿中的表达情况以及在冠状动脉损伤中的作用和机制。方法:(1)收集KD组、肺炎发热组和正常对照组的患儿血清,采用ELISA法检测各组中IL-35和与KD相关细胞因子的血清水平;(2)提取KD组和正常对照组患儿全血标本的DNA,用SNapShot方法分型检测IL-35的基因多态性;(3)采用单次腹腔注射干酪乳杆菌细胞壁提取物(Lactobacillus casei cell-wall extract,LCWE)诱导小鼠川崎病冠状动脉病变模型,HE染色观察小鼠冠状动脉周围炎症细胞的浸润情况,免疫组织化学检测IL-35(p35和EBI3)和p-STAT1的表达,ELISA和Real-time PCR法检测小鼠心脏IL-35(p35和EBI3)、MMP-9、TNF-α和TGF-β的表达水平;(4)IL-35干预小鼠川崎病冠脉病变模型,用ELISA和Real-time PCR法检测TGF-β、MMP-9及TNF-α的表达变化,用Western-blot法及免疫组织化学法检测p-STAT1的表达变化。结果:(1)与肺炎发热组及正常组相比,KD组WBC、PLT、CRP、ESR、PCT、IL-10、IL-17A、IL-6、MCP-1和VEGF水平均明显升高,IL-35、RBC、HB均水平显著降低;较KD不伴冠脉损伤组,ESR、IL-6、MCP-1和VEGF水平在KD伴冠状动脉损伤组明显升高,而IL-35水平较无冠脉损伤组明显降低(p<0.05);血清中IL-35与WBC、CRP、IL-10、MCP-1、IL-17A、VEGF和IL-6呈负相关(p<0.05);(2)IL-35基因各位点的基因型及其等位基因频率在KD组和健康对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。而IL-35基因rs2243115位点的基因型及等位基因频率分布在KD合并CALs组与KD未合并CALs组间差异有统计学意义(P<0.05);完全性川崎病组与不完全性川崎病组的IL-35基因rs353698位点等位基因频率差异具有统计学意义(P<0.05);(3)在LCWE诱导的KD冠状动脉炎小鼠模型组中,IL-35产生并分布于冠状动脉血管壁上。同时冠脉炎小鼠细胞因子IL-35、MMP-9、TGF-β、TNF-α表达较PBS对照组均有明显增高。冠脉炎小鼠模型组STAT1磷酸化及非磷酸化蛋白较PBS组表达均增高。(4)IL-35干预LCWE诱导的冠状动脉炎小鼠模型后,小鼠冠状动脉周围炎症细胞浸润情况减轻;小鼠细胞因子MMP-9、TGF-β、TNF-α表达水平明显降低,TGF-β表达水平明显升高。IL-35干预后,STAT1磷酸化蛋白表达较冠脉炎小鼠模型组表达降低。结论:(1)IL-35可能通过下调相关炎症因子表达水平来抑制KD炎症反应及冠脉损伤的发生。(2)IL-35的基因多态性与儿童川崎病易感性无明显相关,然而IL-35基因rs2243115位点可能与KD合并CALs相关,IL-35基因rs353698位点等位基因G有助于不完全性川崎病的诊断。(3)IL-35可能与抑制促炎因子产生、促进抑炎因子生成及冠状动脉壁炎症细胞浸润相关,从而参与KD冠状动脉损伤的病理过程。(4)IL-35可能通过抑制STAT1信号通路的磷酸化来抑制KD冠状动脉炎小鼠中炎症因子的产生。