论文部分内容阅读
研究背景支气管哮喘简称哮喘是由多种炎性细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、平滑肌细胞、T淋巴细胞等不同种类的效应细胞)和细胞因子、炎性介质等参与和介导的气道慢性炎症,广泛多变的气流受限,是其主要特征。炎症的反复发生和修复过程,使得呼吸道结构发生改变如:平滑肌细胞肥大及增生,气道上皮基底的增厚、狭窄、断裂、变形及Ⅰ型和Ⅲ型纤维蛋白的过度沉积,杯状细胞分泌粘液增加,上皮细胞化生等,此过程被称为气道重塑。随着工业的发展,哮喘疾病的发病率逐年攀升,不断发掘深层次的哮喘治疗靶点,预防哮喘的气道结构改变仍然是当下科学研究领域的重点课题和突破项目之一。白三烯受体拮抗剂用于哮喘急性发作已成功应用于临床,其治疗作用已得到充分肯定,然而其具体机制不甚明了,与气道重构关系亦无明确依据,探究其作用机制,为临床用药提供理论依据便显得尤为重要。Wnt/β-catenin信号通路在呼吸系统疾病的病理生理中发挥重要的作用,首先β-catenin蛋白在维持支气管气道上皮结构完整性和信号转导过程中具有举足轻重地位,有研究说明β-catenin在哮喘气道上皮和气道平滑肌细胞中表达增多,且与气道重塑有密切联系,白三烯受体拮抗剂可经多种信号通路抗纤维化、发挥抗炎及改善早期气道重塑的作用,本实验旨在通过白三烯受体拮抗剂干预哮喘小鼠气道重塑的作用通路,探讨白三烯受体拮抗剂抑制气道重塑的具体作用机制,为临床更好的应用白三烯受体拮抗剂提供理论依据。目的探讨白三烯受体拮抗在哮喘治疗中抑制气道重塑的具体作用机制。方法采用数字表将30只BALB/C雌性小鼠分为对照组、哮喘组、及孟鲁司特钠组,每组10只。哮喘模型的诱导建立采用鸡卵白蛋白(OVA)致敏,对照组则采用等量生理盐水替代(OVA)蛋白。以HE染色法显微镜下观察小鼠肺组织病理改变,ELISA检测血清中OVA-sIgE;RT-PCR法检测肺组织中β-catenin,VEGF以及MLCK mRNA的含量;采用Image-pro plus图像分析软件测定病理切片支气管平滑肌面积(WAm)、支气管管壁面积(WAt),以上指标则采用支气管管腔内周长(PBM)标准化,数据分析采用单因素方差分析中LSD-t法进行组组之间比较,且以P<0.05此标准表示差异有统计学意义。结果HE染色显示哮喘组小鼠支气管周围大量炎症细胞浸润,支气管管壁增厚,上皮细胞粘膜红肿明显,而孟鲁司特钠组小鼠肺组织炎性细胞浸润程度以及支气管壁厚度较哮喘组小鼠明显减轻。小鼠血清所含OVA-sIgE浓度哮喘组中明显高于对照组小鼠(P<0.05),经孟鲁司特钠干预组的小鼠OVA-sIgE含量水平低于哮喘组小鼠(P<0.05),RT-PCR检测哮喘小鼠肺组织中β-catenin、MLCK以及VEGF mRNA的相对表达含量明显高于对照组;孟鲁司特钠组小鼠上述指标均低于哮喘组(均P<0.05)。图像采集分析各组小鼠WAt/PBM、WAm/PBM的比较:哮喘组小鼠显著高于对照组(均P<0.05),孟鲁司特钠组所测WAt/PBM、WAm/PBM均低于哮喘组(均P<0.05)。结论Wnt/β-catenin信号通路的转导可能是哮喘发病机理中重要因素之一,白三烯受体拮抗剂(孟鲁司特钠)可通过影响β-catenin通路的表达,进而影响其下游靶基因VEGF以及MLCK的表达,从而干预哮喘气道重塑。