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目的:明确参仙升脉口服液对SSS小鼠窦房结纤维化的改善作用,并探讨TRPC3通路在参仙升脉口服液改善SSS小鼠窦房结纤维化的作用机制。材料与方法:C57/b6小鼠30只,随机数字表法将小鼠分为病态窦房结综合征模型组(SSS)、参仙升脉口服液治疗组(SSOL)、假手术组(Sham)。利用微量渗透泵(Mini osmotic pump)技术泵入血管紧张素Ⅱ建立病态窦房结综合征模型(sick sinus syndrome,SSS)。造模后,参仙升脉口服液治疗组小鼠每日灌胃参仙升脉口服液15ml/kg,模型组与假手术组每日灌胃同等剂量生理盐水,并利用生物信号采集系统规律性进行心电图监测(分别于造模前即第0天、术后第7天、14天、21天、28天),观察3组小鼠心电图变化,30天后取材。HE染色、Masson染色观察窦房结组织病理变化;WB检测纤维化相关因子I型胶原蛋白α1链(Col1A1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和转化生长因子β(TGF-β),以及TRPC3、Cav3.1、Cav3.2、Cav1.2蛋白的表达情况;IF观察分析Ca2+在窦房结细胞内的表达;PCR检测纤维化相关因子Col1A1、MMP-2、TGF-β以及Cav3.1、Cav3.2、Cav1.2型Ca2+mRNA水平。结果:1.心率:假手术组心率始终无明显变化。各组小鼠第0天心率均为在正常范围内,与假手术组相比,模型组心率于造模后呈下降趋势,且下降趋势明显,于造模28天后仍有下降趋势。实验组经参仙升脉口服液干预后,心率与模型组相比稍有提升,从第14天开始心率提升明显,但较假手术组仍偏慢(P<0.05)。2.HE染色示假手术组窦房结细胞结构完整,界线清楚,神经节间隙可见上皮细胞分布,窦房结细胞无纤维化改变,模型组窦房结明显出现纤维化,纤维化程度严重,与模型组相比,实验组纤维化程度明显减轻,但较假手术组相比,仍可见纤维化改变。3.Masson染色示假手术组小鼠窦房结区域可见组织细胞间纤维构成网状支架,窦房结组织表面动脉与纤维网状结构相互连接,无纤维化;模型组小鼠窦房结区域组织细胞模糊,可见大量成束结缔组织增生,纤维结构网状支架破坏,纤维化程度较重;实验组实质细胞排列整齐,致密,细胞间隙可见少量胶原纤维组织,纤维化程度较轻。4.免疫荧光:我们对小鼠窦房结区域进行了免疫荧光检测,结果发现,与Sham组小鼠相比,SSS组小鼠窦房结区域Ca2+的表达明显升高,SSOL组小鼠的Ca2+表达较模型组明显降低,但相对于Sham组表达仍过高(P<0.05)。5.WB检测:我们对三组小鼠的纤维化相关因子Col1A1、MMP-2、TGF-β,TRPC3以及CAV3.1、CAV3.2、CAV1.2蛋白的含量进行了检测,结果显示SSS组小鼠Col1A1、MMP-2、TGF-β的含量均升高,且TRPC3、CAV3.1、CAV3.2、CAV1.2蛋白的含量与Sham组相比也呈高表达状态,而SSOL组小鼠Col1A1、MMP-2、TGF-β的含量以及TRPC3、CAV3.1、CAV3.2、CAV1.2蛋白的表达均明显低于SSS组,但仍高于Sham组。6.q PCR:q PCR在m RNA水平进一步检测TRPC3、CAV3.1、CAV3.2、CAV1.2蛋白的表达,结果显示与Sham组相比,SSS和SSOL组TRPC3、CAV3.1、CAV3.2、CAV1.2蛋白的表达均高于Sham组,但SSOL组的表达明显低于SSS组。结论:1.参仙升脉口服液可提高病态窦房结综合征小鼠心率,改善窦房结组织纤维化。2.TRPC3通路在参仙升脉口服液改善窦房结组织纤维化中发挥重要作用,其作用机制为抑制细胞外钙离子内流,从而延缓窦房结纤维化的进程。