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利用RT-PCR对来自新疆、黑龙江、宁夏、甘肃、河北省甜菜丛根病病田的各BNYVV分离物中RNA5组分进行检测,在来自于新疆、宁夏和黑龙江的分离物中发现有RNA5的存在,说明在我国发生的BNYVV分离物中广泛存在RNA5组分。对新疆、宁夏和黑龙江分离物中的RNA5进行克隆和序列分析后,与已报道的BNYVV日本D5分离物、法国的F72分离物以及我国内蒙古发现的包头分离物和呼和浩特分离物的RNA5的核苷酸序列和推导氨基酸序列进行同源性比较。结果表明,不同分离物RNA5核苷酸序列的同源性为93.0%~98.7%,变异主要集中在编码蛋白启始密码子AUG前100个核苷酸的区域内。所有RNA5基因组都只包含一个开放阅读框架(ORF),除法国的F72(编码232个氨基酸)外,其它6个分离物都编码228个氨基酸的多肽。各分离物的氨基酸序列同源性为89.7%~98.7%。 构建了RNA5编码蛋白的原核表达载体pETHu26,经IPTG诱导后在大肠杆菌中得到表达,表达的融合蛋白包含载体编码的45个氨基酸和RNA5编码的26kDa蛋白。用融合蛋白免疫家兔,制备了RNA5编码蛋白的特异性抗血清,Western blot分析表明该血清可以用于BNYVV接种番杏叶片后RNA5编码26kDa蛋白的检测。 分别构建了T7启动子和35S启动子控制下的全长RNA5侵染性cDNA克隆,Northern blot检测表明它们都具有侵染性。利用T7控制下的全长RNA5侵染性cDNA克隆pUCHu3的体外转录物与不含RNA5的BNYVV突变株,BNYVV-Hu0和BNYVV-Hu3的RNAs混合接种番杏和甜菜,结果表明RNA5影响病毒侵染后寄主的症状表达和病毒在寄主内的积累,并且和甜菜丛根病的发病程度及甜菜产量有关。这些结果表明除了RNA3外,RNA5是另外一个与BNYVV致病性相关的因素。 在全长RNA5侵染性克隆pUCHu3的基础上构建了4个RNA5编码区缺失突变体和1个点突变体的侵染性克隆。经体外转录后与BNYVV-Hu3的RNAs混合接种番杏,Northern blot检测表明这些突变体的体外转录物都具有侵染性。用编码区翻译起始密码(AUG)突变体侵染性克隆pUCHu3△ATG体外转录物接种番杏叶片,经对发病植物的检测,说明RNA5编码蛋白的表达与否不影响BNYVV在番杏上的症状表现,即RNA5对于BNYVV致病力的影响可能是在核酸水平上的作用。这些突变体对RNA5的功能的影响正在进一步研究中。