【摘 要】
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目的定义NNRXN1β基因的最小启动子区和调节基因转录的功能元件。方法首先通过构建含有NRXN1β基因上游调控区不同区域基因组序列的荧光素酶报告基因质粒,利用双荧光素酶报告
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目的定义NNRXN1β基因的最小启动子区和调节基因转录的功能元件。方法首先通过构建含有NRXN1β基因上游调控区不同区域基因组序列的荧光素酶报告基因质粒,利用双荧光素酶报告基因实验检测报告基因的转录活性以确定NRXN1β基因最小启动子区域,再进一步筛选出相应的显著增强或抑制报告基因活性的功能区；然后利用基因定点突变技术对功能区内和功能区临近DNA序列进行连续的碱基突变,并分析这些突变对报告基因活性的作用；最后结合在线转录因子预测软件PROMO,对功能区内的转录调控位元件进行初步分析。结果成功构建了含有不同启动子区域和含有突变的两个系列的NRXN1β启动子-荧光素酶报告基因,相对荧光素酶活性结果显示p4NRXN1β-88/+668(9.63±1.46)与p4NRXN1β-73/+668(2.08±0.51)相比、p4NRXN1β-106/+156(27.07±3.90)与p4NRXN1β-106/+149 (4.99±O.79)相比、p4NRXN1β-106/+229(25.20±4.67)与p4NRXN1β-106/++419(12.53±1.51)相比,3组数据前者的荧光素酶活性都高于后者,具有统计学差异(P<0.05)；为了评估-88/-73功能区及临近碱基,利用基因定点突变技术成功构建了一系列的含有突变碱基的质粒,双荧光素酶报告基因实验检测结果发现,-84/-63区域内突变的质粒与未突变相比活性降低,差异具有统计学意义(P<0.05),应用生物信息学技术对该区域内可能存在的转录调控位点进行了初步分析,结果发现该区域可以结合2个转录因子DBP和ABF1。结论NRXN1β基因最小启动子区位于-88/+156；含有两个正性作用功能区-88/-73、+156/+149,功能区-84/-63可能含有2个转录因子结合位点。
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