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目的:泌乳素瘤是一种垂体瘤的高发类型,约占全部垂体瘤的40%。垂体瘤的治疗策略包括手术、放疗和药物治疗,其中药物治疗以多巴胺2类受体激动剂为主。术前多巴胺受体激动剂的治疗诱发纤维性坏死而降低成功切除肿瘤的可能,然而多巴胺2类受体激动剂可以有效地治疗泌乳素瘤,主要有溴隐亭、卡麦角林、培高利特等,使泌乳素达到正常水平,肿瘤体积缩小,性腺功能恢复,也对其它的垂体肿瘤如非功能性腺瘤、ACTH型垂体瘤和肢端肥大症有效。对顽固性垂体瘤,卡麦角林药物半衰期更长,发生副作用的风险更低,但溴隐亭比卡麦角林至少少花费一半,两者在其他方面的影响并无差异,因此在中国等发展中国家应用更为广泛。溴隐亭可以诱导垂体瘤细胞凋亡,也有研究表明卡麦角林能激活自噬依赖的细胞死亡通路,抑制泌乳素瘤的生长,但多巴胺受体激动剂对垂体瘤细胞毒性机制仍然未知,本实验为探索药物治疗垂体瘤提供了一种新研究方向。方法:随机选取滨州医学院附属医院2013年6月至2015年12月之间的37例垂体瘤病人术后病理切片,其中17位患者术前只经过溴隐亭的治疗,另外20位患者未经过多巴胺受体激动剂治疗。免疫组织化技术检测垂体瘤组织中LC3蛋白的表达。GH3细胞和MMQ细胞购买自ATCC细胞库,用不同浓度的溴隐亭和(或)雷帕霉素诱导,用CCK-8技术检测细胞活性,ELISA技术检测泌乳素水平,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测LC3-Ⅰ到LC3-Ⅱ转化率和Bcl-2与Bax的比值,免疫荧光法检测细胞在药物诱导后LC3的表达。结果:术前只经过溴隐亭治疗的患者LC3蛋白阳性表达率为100%,另外未经过多巴胺受体激动剂治疗的20位患者LC3蛋白阳性表达率为0%,正常脑组织组阳性表达率为0%。随溴隐亭浓度和时间的增加,GH3和MMQ的细胞活性降低,对MMQ细胞的50%致死量为60μmol/L,对GH3细胞的50%致死量为110μmol/L。低浓度的溴隐亭联合雷帕霉素对细胞的毒性与高浓度的溴隐亭的效果相似。经过药物诱导后的细胞,其细胞周期阻滞在G0-G1期(MMQ:正常G0-G1,73.66%±3.50%vs.溴隐亭G0-G1,93.47%±3.02%;GGH3:正常G0-G1,73.93%± 0.500%vs.溴隐亭G0-G1.92.23%±0.50%)。只经过雷帕霉素诱导后,细胞周期无显著差异(MMQ:正常G0-G1,73.66%±3.50%vs.雷帕霉素 G0-G1,79.92%± 5.28%;GH3:正常 G0-Gi,73.93%±0.50%vs.雷帕霉素Go-G1,79.83%±6.22%)。溴隐亭的诱导同样降低S期细胞的数量(MMQ:正常组,17.68%±1.23%vs.溴隐亭,2.44%±0.16%;GH3:正常 20.58%± 1.33%vs.溴隐亭,5.39%±0.50%)。单独使用雷帕霉素不能有效的减少S期细胞的数量(MMQ:正常,17.68%±1.23%vs.雷帕霉素,17.28%±2.16%;GH3:正常,20.58%± 1.33%vs.雷帕霉素,16.19%±2.50%)。分别经过高浓度的溴隐亭和低浓度溴隐亭联合雷帕霉素诱导后,两者对细胞周期的影响相似(MMQ:正常G0-G1,73.66%± 3.50%vs.低浓度溴隐亭联合雷帕霉素G0-G1,93.67%± 2.89%;GH3:正常 G0-G1,73.93%± 0.50%vs.低浓度溴隐亭联合雷帕霉素 G0-G1,92.91%± 0.64%)。此外,S期的细胞数也降低(MMQ:正常组,17.68%±1.23%vs.低浓度溴隐亭联合雷帕霉素,2.6%± 0.23%;GH3:正常组,20.58%± 1.33%vs.低浓度溴隐亭联合雷帕霉素,3.85%± 0.37%),单独使用高浓度溴隐亭与其效应相似。MMQ分别经过0μmol/L,100nmol/L雷帕霉素,60μmol/L溴隐亭和100nmol/L雷帕霉素联合40μmol/L溴隐亭诱导24小时后,PRL浓度分别为1123±26 ng/L,1092±23 ng/L,299±15ng/L 和 285± 12ng/L;GH3 分别经过0μmol/L,100nmol/L 雷帕霉素,110μmol/L溴隐亭和100nmol/L雷帕霉素联合60μmol/L溴隐亭诱导24小时后,PRL 浓度分别为 786±25 ng/L,775±28,202±13 ng/L 和 189±14 ng/L。在不同浓度的溴隐亭诱导24小时后,随浓度的增大LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大,而在60μmol/L浓度下,随着时间变化LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变大,Bcl-2/BAX比值没有明显的变化,这说明溴隐亭可以诱导垂体瘤细胞发生自噬现象。通过免疫荧光技术,我们发现MMQ和GH3在正常组中LC3在细胞质中低表达,而在溴隐亭诱导24小时后,其表达明显增强。溴隐亭和雷帕霉素共同作用的细胞更易诱发自噬现象。MMQ细胞在溴隐亭(40μmol/L)和雷帕霉素(100nmol/L)联合用药下,LC3的表达量都要比单独使用溴隐亭(60μmol/L)或者单独使用自噬诱导剂雷帕霉素(100nmol/L)高,尤其是LC3-Ⅱ的表达明显增强。结论:经过溴隐亭诱导的垂体腺瘤细胞的死亡方式主要是自噬性细胞死亡(ACD)而不是细胞凋亡。