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目的：
高血压是严重危害人类健康的常见病多发病，是亟待解决的重大健康问题。电针阳明经穴治疗高血压的疗效确切，安全性好，然而其具体机制尚不明确。血管重构是高血压发生发展的重要病理生理基础，血管平滑肌细胞的表型转换是高血压血管重构的重要环节。本次实验使用自发性高血压大鼠为高血压疾病的研究模型。运用无创血压监测系统、HE染色、免疫组化、蛋白免疫印迹法等方法，以PI3K/Akt和MAPK信号通路间平衡为切入点，观察电针阳明经穴对SHR大鼠血压、血管壁形态改变、VSMC表型转换的标志蛋白、PI3K/Akt及MAPK信号转导通路的影响，以明确电针阳明经穴治疗高血压的分子机制。
方法：
选择SHR大鼠32只和WKY大鼠8只(SPF级，雄性，8周龄，体重200-250克，自由进食、饮水)。WKY大鼠8只为正常血压组(W组)。根据随机数字表法，将32只SHR大鼠随机分为模型组(M组)、电针阳明组(EA组)、电针阳明+PI3K阻断组(EA+P组)、电针阳明+MAPK激活组(EA+M组)。各组大鼠采用无创血压监测系统BP-2000测量血压。除W组及M组外，其余组均接受每周5次的电针治疗，穴位选择双侧阳明经穴人迎、曲池、足三里及丰隆，连续4周。W组和M组每日捆绑束缚20分钟，每周5次，共持续4周。W组、M组和EA组于干预前1小时腹腔注射2%二甲基亚枫溶液。EA+P和EA+M组于针刺前1小时，腹腔注射相应阻断剂或激活剂，每周5次，连续4周。干预4周后取胸主动脉观察血管壁厚度。免疫组化检测VSMC表型转换的标志蛋白α-SMA、calponin、OPN。Westernblot测量胸主动脉的PI3K、Akt、p-Akt、p42/44ERK、p-p42/44ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、α-SMA、calponin、OPN的蛋白表达。
结果：
1.血压数据显示：
组内比较：
①与干预前相比，模型组SBP、DBP和MAP上升(p＜0.05)；
②与干预前相比，电针阳明组SBP、DBP和MAP明显下降(p＜0.01)；
③与干预前相比，正常血压组、电针阳明+PI3K阻断组和电针阳明+MAPK激活组SBP、DBP和MAP则无明显差异。
组间比较：
①与正常血压组相比，干预前和干预后模型组SBP、DBP和MAP均明显高于正常血压组(p＜0.01)；
②干预前，模型组、电针阳明组、电针阳明+PI3K阻断组和电针阳明+MAPK激活组SBP、DBP和MAP则无明显差异(p＜0.05)；
③干预后，与模型组大鼠相比，电针阳明组SBP、DBP和MAP显著性降低(p＜0.01)；
④干预后，与电针阳明组相比，电针阳明+PI3K阻断组SBP和MAP明显升高(p＜0.05)，DBP有所升高但差异不具有统计学意义(p＞0.05)，与电针阳明组相比，电针阳明+MAPK激活组SBP、DBP和MAP显著升高(p＜0.05)；
⑤干预后，与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组血压无明显差异(p＞0.05)。
2.HE病理数据显示：
①与正常血压大鼠相比，模型组胸主动脉血管壁增厚明显，差异具有统计学意义(p＜0.01)；
②与模型组相比，电针阳明组血管壁厚度明显下降(p＜0.01)；
③与电针阳明组相比，电针阳明+PI3K阻断组和电针阳明+MAPK激活组血管壁厚度显著增加(p＜0.01)；
④与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组血管壁厚度有所增厚，但差异没有统计学意义(p＞0.05)。
3.免疫组化结果显示：
①与正常血压大鼠相比，模型组大鼠胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin蛋白表达明显减弱(p＜0.01)，而OPN表达明显增强(p＜0.01)；
②与模型组相比，电针阳明组胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin蛋白表达明显增强(p＜0.01)，而OPN的蛋白表达显著性降低(p＜0.01)；
③与电针阳明组相对比，电针阳明+PI3K阻断组胸主动脉血管壁中α-SMA、calponin蛋白表达明显减弱，而OPN表达明显增强(p＜0.01)；电针阳明+MAPK激活组胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin蛋白表达明显减弱(p＜0.01)；OPN表达有所增加，但差异不具有显著性(p＞0.05)；
④与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin和OPN的蛋白表达无明显差异(p＞0.05)。
4.蛋白免疫印迹法结果显示：
①与正常血压大鼠相比，模型组胸主动脉中α-SMA、calponin、PI3K、p-Akt蛋白表达明显减弱(p＜0.01)，而OPN、p-p42/44ERK、p-p38MAPK表达明显增强(p＜0.01)；
②与模型组相比，电针阳明组胸主动脉中α-SMA、calponin、p-Akt蛋白表达显著性增强(p＜0.01)，PI3K表达增加(p＜0.05)，而OPN、p-p42/44ERK、p-p38MAPK的蛋白表达显著性减弱(p＜0.01)；
③与电针阳明组相对比，电针阳明+PI3K阻断组胸主动脉中p-Akt的表达显著性减弱(p＜0.01)，α-SMA、calponin、PI3K的蛋白表达减弱(p＜0.05)，OPN的蛋白表达显著性增强(p＜0.05)，而p-p42/44ERK、p-p38MAPK的表达则无明显差异(p＞0.05)；电针阳明+MAPK激活组胸主动脉中α-SMA，calponin蛋白表达明显减弱(p＜0.05)，而p-p38MAPK的表达显著性增强(p＜0.01)，OPN、p-p42/44ERK表达也明显增加(p＜0.05)但PI3K、p-Akt的表达则无明显差异(p＞0.05)；
④与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组胸主动脉中α-SMA、calponin和OPN的蛋白表达均无明显差异(p＞0.05)，p-Akt、p-p38MAPK表达显著增加(p＜0.01)，PI3K、p-p42/44ERK的表达也有所上调(p＜0.05)。
结论：
1.电针阳明经穴可以有效降低SHR大鼠收缩压、舒张压和平均动脉压，其降压效应可以被PI3K阻断剂或MAPK激活剂减弱。
2.电针阳明经穴可以抑制SHR大鼠胸主动脉血管重构。
3.电针阳明经穴可以抑制SHR大鼠胸主动脉VSMC由收缩表型向合成表型转换。
4.通过调控PI3K/Akt和MAPK通路间平衡，激活PI3K/Akt信号通路，抑制MAPK信号通路，从而抑制VSMC的表型转换，可能是电针阳明经穴发挥降压效应的机制之一。
高血压是严重危害人类健康的常见病多发病，是亟待解决的重大健康问题。电针阳明经穴治疗高血压的疗效确切，安全性好，然而其具体机制尚不明确。血管重构是高血压发生发展的重要病理生理基础，血管平滑肌细胞的表型转换是高血压血管重构的重要环节。本次实验使用自发性高血压大鼠为高血压疾病的研究模型。运用无创血压监测系统、HE染色、免疫组化、蛋白免疫印迹法等方法，以PI3K/Akt和MAPK信号通路间平衡为切入点，观察电针阳明经穴对SHR大鼠血压、血管壁形态改变、VSMC表型转换的标志蛋白、PI3K/Akt及MAPK信号转导通路的影响，以明确电针阳明经穴治疗高血压的分子机制。
方法：
选择SHR大鼠32只和WKY大鼠8只(SPF级，雄性，8周龄，体重200-250克，自由进食、饮水)。WKY大鼠8只为正常血压组(W组)。根据随机数字表法，将32只SHR大鼠随机分为模型组(M组)、电针阳明组(EA组)、电针阳明+PI3K阻断组(EA+P组)、电针阳明+MAPK激活组(EA+M组)。各组大鼠采用无创血压监测系统BP-2000测量血压。除W组及M组外，其余组均接受每周5次的电针治疗，穴位选择双侧阳明经穴人迎、曲池、足三里及丰隆，连续4周。W组和M组每日捆绑束缚20分钟，每周5次，共持续4周。W组、M组和EA组于干预前1小时腹腔注射2%二甲基亚枫溶液。EA+P和EA+M组于针刺前1小时，腹腔注射相应阻断剂或激活剂，每周5次，连续4周。干预4周后取胸主动脉观察血管壁厚度。免疫组化检测VSMC表型转换的标志蛋白α-SMA、calponin、OPN。Westernblot测量胸主动脉的PI3K、Akt、p-Akt、p42/44ERK、p-p42/44ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、α-SMA、calponin、OPN的蛋白表达。
结果：
1.血压数据显示：
组内比较：
①与干预前相比，模型组SBP、DBP和MAP上升(p＜0.05)；
②与干预前相比，电针阳明组SBP、DBP和MAP明显下降(p＜0.01)；
③与干预前相比，正常血压组、电针阳明+PI3K阻断组和电针阳明+MAPK激活组SBP、DBP和MAP则无明显差异。
组间比较：
①与正常血压组相比，干预前和干预后模型组SBP、DBP和MAP均明显高于正常血压组(p＜0.01)；
②干预前，模型组、电针阳明组、电针阳明+PI3K阻断组和电针阳明+MAPK激活组SBP、DBP和MAP则无明显差异(p＜0.05)；
③干预后，与模型组大鼠相比，电针阳明组SBP、DBP和MAP显著性降低(p＜0.01)；
④干预后，与电针阳明组相比，电针阳明+PI3K阻断组SBP和MAP明显升高(p＜0.05)，DBP有所升高但差异不具有统计学意义(p＞0.05)，与电针阳明组相比，电针阳明+MAPK激活组SBP、DBP和MAP显著升高(p＜0.05)；
⑤干预后，与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组血压无明显差异(p＞0.05)。
2.HE病理数据显示：
①与正常血压大鼠相比，模型组胸主动脉血管壁增厚明显，差异具有统计学意义(p＜0.01)；
②与模型组相比，电针阳明组血管壁厚度明显下降(p＜0.01)；
③与电针阳明组相比，电针阳明+PI3K阻断组和电针阳明+MAPK激活组血管壁厚度显著增加(p＜0.01)；
④与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组血管壁厚度有所增厚，但差异没有统计学意义(p＞0.05)。
3.免疫组化结果显示：
①与正常血压大鼠相比，模型组大鼠胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin蛋白表达明显减弱(p＜0.01)，而OPN表达明显增强(p＜0.01)；
②与模型组相比，电针阳明组胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin蛋白表达明显增强(p＜0.01)，而OPN的蛋白表达显著性降低(p＜0.01)；
③与电针阳明组相对比，电针阳明+PI3K阻断组胸主动脉血管壁中α-SMA、calponin蛋白表达明显减弱，而OPN表达明显增强(p＜0.01)；电针阳明+MAPK激活组胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin蛋白表达明显减弱(p＜0.01)；OPN表达有所增加，但差异不具有显著性(p＞0.05)；
④与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组胸主动脉血管壁中α-SMA，calponin和OPN的蛋白表达无明显差异(p＞0.05)。
4.蛋白免疫印迹法结果显示：
①与正常血压大鼠相比，模型组胸主动脉中α-SMA、calponin、PI3K、p-Akt蛋白表达明显减弱(p＜0.01)，而OPN、p-p42/44ERK、p-p38MAPK表达明显增强(p＜0.01)；
②与模型组相比，电针阳明组胸主动脉中α-SMA、calponin、p-Akt蛋白表达显著性增强(p＜0.01)，PI3K表达增加(p＜0.05)，而OPN、p-p42/44ERK、p-p38MAPK的蛋白表达显著性减弱(p＜0.01)；
③与电针阳明组相对比，电针阳明+PI3K阻断组胸主动脉中p-Akt的表达显著性减弱(p＜0.01)，α-SMA、calponin、PI3K的蛋白表达减弱(p＜0.05)，OPN的蛋白表达显著性增强(p＜0.05)，而p-p42/44ERK、p-p38MAPK的表达则无明显差异(p＞0.05)；电针阳明+MAPK激活组胸主动脉中α-SMA，calponin蛋白表达明显减弱(p＜0.05)，而p-p38MAPK的表达显著性增强(p＜0.01)，OPN、p-p42/44ERK表达也明显增加(p＜0.05)但PI3K、p-Akt的表达则无明显差异(p＞0.05)；
④与电针阳明+PI3K阻断组相比，电针阳明+MAPK激活组胸主动脉中α-SMA、calponin和OPN的蛋白表达均无明显差异(p＞0.05)，p-Akt、p-p38MAPK表达显著增加(p＜0.01)，PI3K、p-p42/44ERK的表达也有所上调(p＜0.05)。
结论：
1.电针阳明经穴可以有效降低SHR大鼠收缩压、舒张压和平均动脉压，其降压效应可以被PI3K阻断剂或MAPK激活剂减弱。
2.电针阳明经穴可以抑制SHR大鼠胸主动脉血管重构。
3.电针阳明经穴可以抑制SHR大鼠胸主动脉VSMC由收缩表型向合成表型转换。
4.通过调控PI3K/Akt和MAPK通路间平衡，激活PI3K/Akt信号通路，抑制MAPK信号通路，从而抑制VSMC的表型转换，可能是电针阳明经穴发挥降压效应的机制之一。