论文部分内容阅读
细胞趋化因子(Chemokines)是一些结构相关的炎症前期肽类,介导白细胞的迁移和激活。根据其中四个高度保守的半胱氨酸残基的相互位置关系,把细胞趋化因子分为四类亚族:CXC、CC、C、CX3C。CXC Chemokines是指四个丝氨酸残基中的前两个被一个氨基酸所分隔,包括IL-8(白细胞介素8)、GROα、GROβ、GROγ(生长相关癌基因)等,彼此间有25-90%的同源性,绝大多数都激活和趋化中性粒细胞,细胞趋化因子受体属于视紫红质G蛋白偶联受体超家族。有七个跨膜片段(STR),趋化物-STR-G蛋白通路是最明了的白细胞激活途径,相应于四类细胞趋化因子,有四类受体:CXCR,CCR,CX3CR和CR。 IL-8是1986年发现的一种中性粒细胞趋化因子。目前发现在适当的刺激下多种细胞均可合成和分泌IL-8。如单核细胞、T细胞、巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞和表皮细胞等,人类多种肿瘤细胞和细胞系均可高表达IL-8,其中甲状腺癌、黑素瘤、胶质细胞瘤、白第四军医大学硕土学位论文血病细胞等可稳定产生*-8。 在中枢神经系统中,IL{ 被发现存在于室旁核和海马区。IL七 在人正常垂体中无表达,在部分腺瘤(裸细胞腺瘤,促性腺细胞腺瘤)中有表达,其中大部分瘤细胞都呈阳性。本实验室用免疫组化发现,IL{样免疫阳性物质稳定的存在于部分成年大鼠垂体前叶细胞中,主要是GH生长激素)细胞,少量为PRL(催乳素)细胞和ACTH(促肾上腺素)细胞,而少见与其它垂体前叶激素共存。垂体*{样免疫阳性物质在大鼠发育过程中会发生一定的变化,雌激素可以影响IL七样免疫阳性物质在垂体内的水平。 IL-8具有多种生物学活性,如趋化和激活中性粒细胞,并使其发生呼吸爆发、释放超氧化物和溶酶体酶及使细胞内钙离子浓度迅速短暂升高。IL-8可以作用于单核细胞,嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞,T淋巴细胞和内皮细胞的迁移和/或激活。IL-8还被发现是一种新的促进血管生成的因子。目前发现IL七与临床许多疾病的发生和治疗有密切的关系。 IL七的生物学作用是通过其相应受体介导完成的。ILE受体的命名有很多种,如AB a 0等1996年国际上统一命名为CXCRI和CXCRZ。所有受体都属于G蛋白偶联受体,能与L-8结合的受体除了L{ 伯细胞介素8 A型受体XIL{ 白细胞介素8 B型受体),还有 DARC(细胞趋化因子 Duffy抗原受体)和 saimiri疤疹病毒(HVS)编码的ECRF3R。 人 IL-SRA和IL-SRB基因者定位于染色体2q35,IL七RA与IL-SRB基困密切连锁和高度同源,可能是从同一祖先基因经复制而来。IL-SRA在氨基酸水平上与*-SRB有78%同源性,IL-SRA高亲合力地特异性结合 IL-8,受体主要分布于中性粒细胞、单核细胞、T细 4第四军医大学硕士学位论文胞和黑素瘤细胞。IL-SRB 与L-8和其它趋化中性粒细胞的CXCChemokines有高亲合力。此型受体细胞来源比较小,主要分布于中性粒细胞和髓样细胞前体细胞系,如 HL60细胞系以及 THP上细胞和AMC 93细胞。 DARC是人红细胞Dllffi抗原馆pD),也是微小间日疟原虫受体。IL{等趋化困子在红细胞上结合D ARARC后即失去了对靶细胞的作用。红细胞的这种清除作用意义在于维持一个合适的趋化因子浓度。 HVS是一种限定于灵长类的促 T淋巴细胞 Y疤疹病毒,它的开放性读框EC肝3的产物具有盯R基序,K以结合L七,称为EC肝3受体,是第一个病毒的盯R。ECRF3对*E的敏感性比*{。J门 倍,但对 GRO a和 NAP-2的敏感性是L-SRB的 200倍。这提示 saimiri疤疹病毒感染的细胞具有对 GRO a和/或 NAP上(中性粒细胞激活肽 2)的跟感性,可以增强病毒的复制。 大鼠的几-SR也分为 A、B型,不同于人L-SRS有两型不同的基困,大鼠 IL七 仅存在单拷贝基困,两型受体有 65%的同源性。和人 IL-SRs的同源性约为70O,其中*L-SRB和血L-SR有86O的同源性。rIL-slLkiTlrtriA为 1383 hp,蛋白由349氨基酸组成,rIL-SRBmRNA为1乃9 hP,蛋白由359氨基酸组成。ILE 在大鼠许多细胞(。中性粒细胞、巨噬细胞,嗜碱性粒细胞,单核细胞和B细胞)上均有丰富表达,在心脏,肝,脾,肺,肾和骨骼肌等组织中也有表达。而其在脑垂体组织中是否表达则未有报道。 洲究的目的在于从组织、细胞及分子水平上,探讨IL七 在大鼠脑垂体中的分布和表达。首先取新鲜垂体组织经 Bouins液固定后,常规石蜡包埋、切片及贴片。用兔抗大鼠*8 多杭经免疫组化 5第四军医大学硕士学位论文ABC法染色,葡萄糖氧化酶-DAB-硫鞭锭法显色。实验中采用PBS代替一抗,作为空白对照。观察该受体在垂体中的分布。然后提取垂体组织和原代培养细胞的总RNA?