1.根据GenBank中已发表的枯草芽孢杆菌pgsA基因序列，设计合成了一对能扩增1155bp基因片段的引物，引物两端分别有KpnⅠ和BamHⅠ的酶切位点。以枯草芽孢杆菌染色体DNA为模板，经PCR扩增得到目的片段，然后将其克隆到pMD18-T载体上，经蓝白斑筛选和酶切鉴定选择阳性克隆进行序列测定，构建成功的重组质粒命名为pMD18-T-pgsA。用DNAstar软件将其与GenBank上的pgsA序列进行同源性比较，结果表明核苷酸同源性在90％以上，氨基酸同源性94％以上。核苷酸序列系统进化树分析，发现该试验株与浙江株亲缘关系最近。经ProtScale软件分析表明:该基因所编码蛋白在靠近其N端存在一个跨膜区，为跨膜表达体系的建立和新型口服基因工程疫苗的研制奠定了一定的基础。　　 2.将猪传染性胃肠炎病毒接种ST细胞进行增殖，待细胞出现明显的病变后，将细胞反复冻融三次收获病毒。根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒S基因的序列，设计合成了一对扩增S基因包含A抗原位点724bp基因片段(Sa)的引物，引物两端分别有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点。以感染细胞提取的病毒RNA为模板，经RT-PCR扩增得到目的片段，然后将其克隆到pMD18-T载体上，经蓝白斑筛选和酶切鉴定选择阳性克隆进行序列测定，构建成功的重组质粒命名为pMD18-T-Sa。用DNAstar软件将其与GenBank上的序列进行同源性比较，结果表明核苷酸同源性为97％以上，氨基酸同源性为93％以上。根据猪传染性胃肠炎病毒Sa基因核苷酸序列绘制的系统进化树，结果表明，试验株与TH-98株亲缘性最近。　　 3.对克隆载体pMD18-T-pgsA做KpnⅠ和BamHⅠ的双酶切，将所得片段插入表达载体pET-32a(+)，构建了重组质粒pET-pgsA，对克隆载体pMD18-T-Sa和重组质粒pET-pgsA分别做BamHⅠ和HindⅢ双酶切，将Sa片段插入到pET-pgsA中，构建重组质粒pET-pgsA-Sa。重组质粒经PCR和酶切鉴定为阳性后，转化入宿主菌E.coli BL21(DE3)中，IPTG诱导表达，经SDS-PAGE电泳分析表明，在70kDa处出现了与预期大小相符的目的条带。摸索最佳诱导条件(25℃，IPTG1mM/L，220r/min诱导5h)，经Western-blot试验进一步证实，融合基因pgsA-Sa获得正确表达，具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验初步证实融合蛋白在大肠杆菌表面获得了表达。