目的:1.验证慢性乙肝患者血清中是否存在cccDNA,探讨与之相关的因素和临床意义。2.验证慢性乙肝患者(包括8例肝移植术后患者)外周血单核细胞内是否存在cccDNA,探讨其可能的临床意义。方法:以103例慢性乙肝患者(包括8例肝移植术后患者)为研究对象,应用荧光定量PCR检测血清及外周血单核细胞内HBV-DNA;用碱裂解法及绿豆核酸酶酶切,提取及纯化血清及外周血单核细胞内cccDNA以减少样品中混杂的rcDNA及线状双链DNA。同时设计一对跨两缺口的引物,以避免扩增时线状双链DNA带来的假阳性;应用增效PCR法以提高PCR技术的敏感性。结果:103例患者血清中HBVcccDNA的阳性率为41.7%。比较不同的HBV-DNA载量组间、不同的ALT组间,cccDNA的阳性率在统计学上有显著性差异(P﹤0.05);比较不同的发病时段组间,cccDNA的阳性率亦有显著性差异(P﹤0.05)。外周血单核细胞内HBV-DNA总阳性率为45.6%,比较血清不同HBV-DNA载量组间,其外周血单核细胞内HBV-DNA阳性率有显著性差异(P﹤0.05);比较不同组的阳性患者,其血清及单核细胞内HBV-DNA载量均有明显统计学意义。其中43例慢性乙肝患者(包括8例肝移植术后患者)外周单核细胞内cccDNA检测均阴性。结论:1.在血清中可检测到cccDNA,肝细胞坏死可能为其来源之一。2.血清中cccDNA的阳性率随HBV-DNA的载量,ALT升高而增高,随发病时间延长而降低。3.慢性乙肝患者外周血单核细胞内可检测到HBV-DNA,未检测到cccDNA。不能肯定HBV在外周血单核细胞内复制。4.血清病毒载量越高,单核细胞内病毒量也越高,单核细胞内病毒可能来源于血清。5.肝移植术后乙肝患者外周血单核细胞内未检测到HBVcccDNA,表明肝移植术后复发非HBV在单核细胞复制所致。