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佐剂是添加在疫苗中的一种用来增强抗原免疫原性和诱导机体产生更强烈抗感染保护作用的一种物质。现代疫苗佐剂通常可分为三类:免疫刺激剂类和载体类,部分佐剂兼具两种性质。纳米佐剂作为一种新型佐剂,对疫苗免疫效果有良好的增强作用,且具有较好的安全性,但目前对其作用机制的研究仍然不够深入。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是引起猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of pigs,TGE)的病原体。该病是以临床症状为严重腹泻、呕吐和脱水等为显著特征的高度接触性传染病。2周龄以内仔猪感染本病后死亡率可达100%。目前市场上已经有TGEV灭活疫苗和弱毒疫苗,但这些疫苗并不能给仔猪带来足够的免疫保护,免疫后仔猪发病率和死亡率依然较高。因此,本研究制备了两种佐剂的TGEV灭活疫苗,并研究了其对小鼠的免疫效果。并对纳米硅佐剂增强疫苗免疫效果的机制作了初步研究。具体研究内容如下:1分别制备了纳米硅佐剂TGEV灭活疫苗和氢氧化铝佐剂TGEV灭活疫苗,并对其安全性进行评价。将两种疫苗分别免疫小鼠后评价其免疫效力。结果发现,两种制备的疫苗安全性良好,能使小鼠产生免疫反应,纳米硅佐剂TGEV灭活疫苗相对于氢氧化铝佐剂TGEV灭活疫苗能诱导小鼠产生更强烈的细胞免疫和体液免疫。2用两种制备的TGEV灭活疫苗免疫小鼠,免疫后24h和48h分别取免疫部位肌肉,提取总RNA后进行基因表达谱检测。结果发现纳米硅佐剂TGEV灭活疫苗能引起CD7,CD86,TLR1,TLR4,TLR6,CD40,TLR2,IRF5,IRF7,TLR3,TLR7,OASL1,OAS3,NOD2,IRAK4等大量免疫相关基因上调,以及免疫相关go term如固有免疫、炎性反应、趋化因子活化等功能基因和Pathway如Toll样受体信号通路等的富集。分析发现纳米硅佐剂TGEV灭活疫苗能显著诱导小鼠固有免疫系统的激活。3用两种制备的TGEV灭活疫苗免疫小鼠,免疫后24h和48h,用荧光定量PCR方法检测免疫相关通路中关键因子的表达情况。结果发现纳米硅佐剂能引起Toll样受体通路中IRAK1、IRF5、Myd88、TICAM2、TRAF6、TICAM 1等因子表达显著升高,并能激活NF-κB通路。证明纳米硅佐剂通过Toll样受体信号通路启动了机体的固有免疫系统以及适应性免疫。本研究制备了纳米硅佐剂TGEV灭活疫苗并验证了其免疫效果,同时还初步研究了其增强疫苗免疫效果的作用机制。结果证明纳米硅佐剂TGEV灭活疫苗通过激活Toll样受体信号通路调节IL6、TFNα、IFNγ等细胞因子和炎性因子的产生和释放,进而快速激活机体的固有免疫系统以及适应性免疫,来达到增强疫苗免疫效果的目的。这些发现为进一步研究纳米硅佐剂增强疫苗免疫效果的作用机制奠定了基础。