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蛇毒是含有多种生物活性蛋白和多肽的混合物，具有广泛的生物学活性。采用捕蛇或养蛇的方法获得蛇毒进而分离纯化蛇毒蛋白存在得量少、纯度低的局限性，因而利用基因工程方法生产高纯度蛇毒蛋白迫在眉睫。蛇毒中的纤溶酶原激活物是具有独特活性的丝氨酸蛋白酶，可专一性地将纤溶酶原变成纤溶酶，溶解纤维蛋白，达到溶解血栓的目的。并且具有半衰期长、选择性强等优点，有较强的开发潜力。目的：1.对中国大连蛇岛蝮蛇(Gloydius shedaoensis shedaoensis, GSS)毒腺(GSSG)的cDNA文库(GSSG-cDNA)进行表达序列标签(ESTs)测定，获得GSSGESTs序列；2.利用基因工程的方法对GSSG中的纤溶酶原激活物(Plasminogenactivator, PA)进行基因克隆和蛋白表达。方法和结果：1.从本实验室构建的GSSG-cDNA文库阳性重组子中随机挑选216个单克隆进行5，端EST单向测序。获得了211条高质量的ESTs, NCBInr数据库Blast X比对分析表明，84条序列为已知功能基因，29条序列为未知功能基因，98条序列为新基因；2.以GSSG-cDNA文库质粒为模板，根据GSSG-PA的肽段序列TLCAGTQQGG设计一段中间引物，以文库质粒载体pDNR-LIB对应的M13引物作为上下游引物，PCR反应扩增得到GSSG-PA基因；3.对GSSG-PA基因11个密码子定点突变成大肠杆菌的优选密码子，得到GSSG-PA’基因。构建了pGEX-6P-1-GSSG-PA’表达载体，并在大肠杆菌BL21中诱导表达，结果显示GSSG-PA蛋白以包涵体形式存在；4.构建了pPIC9K-GSSG-PA表达载体，电转化到真核体系即毕赤酵母菌株GS115中进行表达，菌落PCR证实目的基因成功整合在酵母染色体上；5.构建pCold I-GSSG-PA’表达载体，在诱导GSSG-PA蛋白表达时发现了其明显的抑菌作用。结论：1.成功获得GSSG的部分ESTs序列，为GSSG蛋白活性组分基因的克隆、表达和功能研究奠定了一定基础；2.获得了GSSG-PA基因；3.成功构建了pPIC9K-GSSG-PA表达载体、pGEX-6P-1-GSSG-PA’表达载体、pCold I-GSSG-PA’表达载体；4.得到了包涵体形式的GSSG-PA蛋白；5.发现GSSG-PA蛋白在诱导表达过程中呈现明显的抑菌作用。