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引言急性肾损伤是一组由多种病因导致的、以短时间内血肌酐显著上升为共同特点的临床综合征,是一种临床常见的急、危、重症,肾毒性药物所致的急性肾损伤是其中较常见的一类。临床常用的抗肿瘤药、免疫抑制剂、抗生素等都有引起急性肾损伤的风险,其中抗肿瘤药物顺铂的肾毒性是较常见和严重的。顺铂(Cisplatin),化学名为顺式-二氯二氨合铂(cis-dischlorodiammine-platinum, CDDP),是金属铂类络合物的一种,因其阻止DNA复制并影响RNA和蛋白质的合成,具有抗肿瘤作用强、抗瘤谱广的特点,被广泛应用于多种实体肿瘤的治疗中。顺铂的治疗作用呈剂量依赖性,其给药后在肾脏组织中浓度最高,累积毒性可导致患者出现急性肾衰竭等严重后果,有报道顺铂造成的肾毒性约25%发展为急性肾衰竭,大大限制了其在临床大剂量和长期的应用。近年研究表明,顺铂通过参与氧化应激与炎症反应等复杂分子过程,导致肾小管上皮细胞凋亡与坏死。目前,临床尚无有效防治顺铂肾毒性的方法,因此,如何减轻或预防顺铂所致的肾损伤具有十分重要的临床意义和价值。肝X受体(Liver X receptors, LXRs)作为配体依赖性核受体超家族成员之一,是一种转录调节因子,分为α(主要表达于肝、脂肪组织、肾、小肠和巨噬细胞)和β(广泛表达)两种亚型。LXRs广泛参与脂质代谢,并在炎症反应的调控和固有免疫中发挥重要作用。近年来LXRs与炎症反应的关系是研究热点,T0901317是人工合成的LXRs激动剂,能同时激活α和β两种受体类型,体外实验证明肝X受体激活后可减少IL-6、COX-2等炎症介质的释放,负性调节炎症反应,并明显降低脂多糖LPS介导的TNF-α及PGE2的产生；在人肾小管上皮细胞系(HK-2)中,脂多糖抑制肝X受体mRNA及蛋白质的表达；在高糖动物模型中,LXR激动剂可通过抑制过氧化发挥保护作用。目前,肝X受体在肾脏中的生物作用尚不十分明确,LXRs激活后能否对急性肾损伤发挥保护作用?T0901317如何在顺铂所致肾损伤中发挥作用?为解答以上问题,同时为开发临床肾脏保护药物提供更多依据,我们复制顺铂肾损害模型,设计了以下实验。目的1.构建顺铂性肾损伤小鼠模型；2.观察T0901317激活肝X受体后是否对顺铂性肾损伤小鼠发挥肾脏保护作用；3.研究T0901317对顺铂性肾损伤小鼠的肾脏保护作用机制。方法1.顺铂性肾损伤小鼠模型构建8-10周龄雄性C57BL/6小鼠适应性喂养7天后,40只小鼠随机分为4组：对照组、顺铂组、顺铂+T0901317组、T0901317组。顺铂组和顺铂+T0901317组小鼠均给予一次性腹腔注射顺铂20mg/Kg(以生理盐水溶解,配置成2mg/ml顺铂溶液),对照组小鼠注射等量生理盐水。12小时后,顺铂+T0901317组小鼠给予T0901317灌胃3天(lOmg/Kg／天),T0901317组用等量T0901317灌胃,顺铂组小鼠则用T0901317的有机溶剂——二甲基亚砜(DMSO)灌胃。注射顺铂3天后,处死小鼠,采集下腔静脉血并分离肾脏组织。2.肾功能测定用相应的ELISA试剂盒检测小鼠血浆尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)。3.肾脏组织学检测小鼠肾脏经多聚甲醛固定、石蜡包埋并切片后,分别行HE染色和PAS染色,镜下观察肾组织损伤情况,依肾小管损伤百分比进行组织损伤分级：0,无损伤；1级,<25%；2级,25-50%;3级,50-75%；4级,>75%。4.实时定量RT-PCR检测提取肾组织mRNA,实时荧光定量RT-PCR检测GAPDH、LXR、LXRβ、ABCA1、 ABCG1、TNF-α、IL-1β、 P47phox、gp91phox、COX-2、MCP-1及ICAM-1的表达水平。5. Western Blot检测提取肾组织蛋白,Western Blot检测TNF-α、 P47phox、gp91phox及COX-2的蛋白表达水平。6.肾PGE2含量测定用相应的试剂盒检测肾组织内PGE2含量。7.硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)检测ELISA试剂盒检测肾脏硫代巴比妥酸反应产物(TBARS).8.统计学处理使用统计软件SPSS11.0处理实验数据,组间均数的比较采用方差齐性检验与单因素方差分析,定量数据用均数±标准差表示,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.小鼠的一般情况与对照组相比,腹腔一次性注射顺铂3天后,小鼠状态较差,进食、活动等明显减少,嗜睡,拥挤在一起,精神萎靡,毛发灰暗无光泽。各组小鼠自顺铂注射后体重变化不明显,统计学上差异不显著。2.T0901317对LXRs目标基因的影响ABAC1和ABCG1是评价肝X受体活化的目标基因。顺铂+T0901317组和T0901317组ABAC1及ABCG1mRNA水平都明显升高(P<0.01)。3.T0901317减轻顺铂所致肾功能不全与正常对照组小鼠相比,顺铂组小鼠的血尿素氮升高约4.5倍,肌酐升高约4倍(P<0.05)。T0901317可明显减轻顺铂诱导的肾功能不全(P<0.05)。4.T0901317减轻顺铂所致的肾脏组织学变化顺铂组小鼠肾脏产生显著的病理变化,如：肾小管扩张、小管坏死、蛋白管型、肾小管上皮细胞脱落,T0901317能明显减轻这些组织学改变。组织病理半定量分析中,顺铂+T0901317组的组织损伤指数明显低于顺铂组(P<0.01)。5.T0901317减轻顺铂介导的肾脏炎症反应与正常对照组相比,顺铂组肾脏TNF-α mRNA和蛋白的表达水平分别升高了4.7倍和4.5倍,外周血的TNF-α水平升高6.9倍(P<0.05),而顺铂+T0901317组TNF-α的表达水平明显降低。同样,顺铂上调肾脏IL-1β、MCP-1、ICAM-1、 VCAM-1的mRNA水平,T0901317能抑制这些变化。故T0901317处理能降低炎症因子、趋化因子和粘附因子的表达,减轻顺铂介导的肾脏炎症反应。6.T0901317减轻顺铂介导的肾脏氧化应激顺铂组肾脏P47phox和gp91phoxmRNA水平较正常组分别高5.6倍和4.4倍(P<0.05),T0901317可显著降低其高表达。TBARS水平的变化及T0901317的治疗效果与P47phox和gp91phox结果一致。7.T0901317减轻顺铂所致的肾脏COX-2过表达与对照组相比,顺铂诱导COX-2mRNA和蛋白表达分别增高9倍、13倍(P<0.01),而T0901317可分别下调其表达至2.6倍及4.6倍。另外,顺铂可诱导mPGES-1表达升高、PGE2生成增多,而T0901317治疗可明显降低mPGES-1的高表达,使PGE2生成减少。结论1.肝X受体激动剂T0901317可明显改善顺铂诱导的肾功能不全及肾脏病理改变。2.初步探讨T0901317的肾脏保护作用机制。T0901317通过减轻炎症反应和氧化应激,抑制TNF-α、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、P47phox、p91phox、COX-2、 mPGES-1及PGE2的表达及释放,从而起到肾脏保护作用。3.为肝X受体激动剂T0901317作为临床治疗急性肾损伤的新型药物开发提供更多证据及思路。