转Ebf合成酶基因水稻对水稻害虫趋避性的研究

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蚜虫做为农业生产中的一类重要害虫,除直接取食外,不仅能通过排泄的蜜露孳生病害,而且还是传播植物病毒病的首要媒介。当今害虫防治的理念,已经由过去的“灭杀”转向现代的“调控”,调控的目的是利用“作物——害虫——天敌”三营养层的关系来对害虫进行有效的控制,既对环境友好,又有利于生态平衡。[反]-β-法尼烯是蚜虫报警信息素的主要成分,当蚜虫受到天敌捕食或者拟寄生物攻击时,会释放出[反]-β-法尼烯,使周围的蚜虫感知并迅速逃离。通过转基因技术将[反]-β-法尼烯合成酶基因转入到水稻中,使水稻通过内源表达产生[反]-β-法尼烯,释放到环境中,对蚜虫起到警戒作用,这样对环境保护、食物安全、害虫天敌的保护都是非常有利的。   本研究利用克隆自薄荷(Mentha×piperita)的Eβf合成酶基因,使用基因工程技术将其连接到载体pCAMBIA1300s上,通过农杆菌介导的遗传转化法将其导入粳稻品种中花11中,再通过行为试验来检测转基因后代的抗虫性,为转基因抗虫育种提供有用的资源。主要研究结果如下:   1.通过PCR方法将Eβf合成酶基因从质粒pArt7-EBFS上扩增下来后,连接到载体pCAMBIA1300s上。   2.通过农杆菌介导的遗传转化法将构建好的载体导入到粳稻品种中花11中,经过筛选、分化、生根等得到转基因植株65棵。   3.对转基因植株后代进行PCR检测、Southern blot检测、发芽试验、表型观察等,共筛选出4个纯合单拷贝的性状良好的转基因家系。   4.对筛选出的4个T2代转基因家系进行蚜虫的驱避性实验,结果表明转有Eβf合成酶基因的转基因家系对蚜虫具有良好的驱避性。   5.利用Y型嗅觉仪对筛选出的4个T2代转基因家系进行褐飞虱的驱避性试验,结果显示转基因家系对褐飞虱的驱避效果不明显。   6.利用Y型嗅觉仪对筛选出的4个T2代转基因家系进行二化螟的驱避性试验。结果显示转基因家系对二化螟的驱避效果不明显。
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