应用cDNA-AFLP技术分离安吉白茶阶段性返白过程的差异表达基因

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安吉白茶是在浙江安吉发现的茶树自然突变体,其叶片具有阶段性返白现象。安吉白茶叶片在阶段性返白过程中,氨基酸含量差异显著,白期叶总氨基酸含量为绿期叶的2-3倍。本文应用cDNA-AFLP技术分离安吉白茶阶段性返白过程的差异表达基因,并对差异表达基因序列进行分析,以寻找与安吉白茶优异品质相关的基因,对充分开发和利用我国珍贵茶树资源具有重要意义。本文主要研究结果如下:1.建立了分辨率高、重复性好的茶树cDNA-AFLP银染技术体系。根据所建立的cDNA-AFLP银染技术体系,对安吉白茶进行研究,结果发现,相同或不同引物组合对安吉白茶白期或绿期叶扩增均呈现出十分丰富的多态性。2.应用cDNA-AFLP银染技术,对安吉白茶白期叶和绿期叶的基因表达进行了分析。结果表明,安吉白茶白期叶和绿期叶的基因表达有明显差异。其中白期特异表达的有163条带,绿期特异表达的有62条带。选取其中135个重复性好的差异条带,进行回收、克隆、测序及BlastX比对,结果有31个比对出同源序列,其中5个分别与抗寒、抗旱、儿茶素类物质代谢、呼吸作用、水分运输通道相关;18个与细胞周期相关;4个与信号传导相关;3个与生物碱合成相关;1个功能未知;104个在GeneBank数据库中未找到同源序列。3.采用半定量PCR技术对31个比对出同源性的差异表达基因在安吉白茶白期与绿期叶片中的表达水平进行验证,结果表明,有7个基因在白期叶中的表达水平明显高于绿期叶。差异基因的表达产物可能与安吉白茶返白期的高氨基酸或是色素变化等差异性状相关。通过本论文的研究,建立了适于茶树的cDNA-AFLP银染技术体系,并分离了安吉白茶阶段性返白过程的差异表达基因,为进一步研究安吉白茶返白期品质差异形成的分子机理奠定了基础。
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