【摘 要】
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目的探讨被转化生长因子b激活的长链非编码RNA(Long non-coding RNA activated by transforming growth factor-b,lnc RNA-ATB)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及分析其作用机制。方法采用反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测瘢
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目的探讨被转化生长因子b激活的长链非编码RNA(Long non-coding RNA activated by transforming growth factor-b,lnc RNA-ATB)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及分析其作用机制。方法采用反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中ATB、micro RNA-200c(mi R-200c)和DNA甲基转移酶DNMT3B(DNA methyltranserase DNMT3B,DNMT3B)的表达水平,并分析三者的相关性。在成纤维细胞中分别转染sh-ATB、o/e-ATB、mi R-200c mimics、mi R-200c inhibitors和sh-DNMT3B,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;双荧光素酶测定法检测ATB和mi R-200c、以及mi R-200c和DNMT3B靶向结合情况;免疫印迹法(Western blot)和RT-PCR检测增殖相关分子周期素依赖性激酶6(Cyclin-dependent kinase 6,CDK6)和凋亡相关分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达水平。结果ATB和DNMT3B在瘢痕疙瘩组织中的表达水平均高于正常皮肤(P<0.05),mi R-200c在瘢痕疙瘩组织中的表达水平低于正常皮肤(P<0.05),同时ATB和mi R-200c(rs=-3.429)、以及mi R-200c和DNMT3B(rs=-2.011)在瘢痕疙瘩组织中呈负相关(P<0.05)。双荧光素酶结果显示ATB能够靶向结合mi R-200c,mi R-200c能够靶向结合DNMT3B。在瘢痕疙瘩成纤维细胞中转染sh-ATB或mi R-200c mimics后,细胞的增殖能力和增殖相关分子CDK6的表达水平均降低(P<0.05),细胞的凋亡率和凋亡相关分子caspase-3的表达水平均升高(P<0.05)。在回复实验中,瘢痕疙瘩成纤维细胞中共转染sh-ATB和mi R-200c inhibitors能够逆转单独转染sh-ATB对细胞增殖和凋亡的影响(P>0.05),共转染o/e-ATB和mi R-200c inhibitors能够进一步加强单独转染o/e-ATB对细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05);瘢痕疙瘩成纤维细胞中共转染mi R-200c inhibitors和sh-DNMT3B能够逆转单独转染mi R-200c inhibitors对细胞增殖和凋亡的影响(P>0.05),共转染mi R-200c mimics和sh-DNMT3B能够进一步加强单独转染mi R-200c mimics对细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05)。结论ATB在瘢痕疙瘩组织中高表达,低表达ATB能够通过调控mi R-200c/DNMT3B通路抑制成纤维细胞增殖和促进细胞凋亡。
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