【摘 要】
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目的:分子流行病学方法检测厦门地区乙型肝炎病毒（HBV）病毒株前前S基因编码的广泛性。酵母双杂交技术自健康人肝细胞cDNA文库中筛选HBV全S蛋白相互作用蛋白基因,并以反向酵母双杂交方法验证候选结合蛋白。通过病毒蛋白-宿主蛋白作用探讨全S蛋白在肝细胞内的可能存在的分子作用机制。方法:应用多聚酶链反应（PCR）技术自慢性HBV感染患者外周血扩增全S基因序列,选择克隆进行DNA测序及生物信息学分析。选
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目的:分子流行病学方法检测厦门地区乙型肝炎病毒（HBV）病毒株前前S基因编码的广泛性。酵母双杂交技术自健康人肝细胞cDNA文库中筛选HBV全S蛋白相互作用蛋白基因,并以反向酵母双杂交方法验证候选结合蛋白。通过病毒蛋白-宿主蛋白作用探讨全S蛋白在肝细胞内的可能存在的分子作用机制。方法:应用多聚酶链反应（PCR）技术自慢性HBV感染患者外周血扩增全S基因序列,选择克隆进行DNA测序及生物信息学分析。选择克隆w216作为研究靶基因,定向克隆到pDEST32构建表达全S基因诱饵质粒,命名为pDEST32-w216,western blot法验证pDEST32-w216的表达。酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,选择阳性克隆质粒DNA测序,进行生物信息学技术分析。根据正向酵母双杂交的结果,PCR法扩增醛缩酶B、纤维蛋白原α链、类蓟苦素γ家族成员6、烯酰辅酶A水合酶基因构建成诱饵质粒,将4个不同突变株全S基因构建成猎物质粒,反向酵母双杂交法验证正向筛选候选结合蛋白。结果:成功自20个患者中测序全S区基因20条序列,18个来自C2亚基因型的病毒S基因均编码前前S基因。以w216为靶基因经酵母双杂交实验研究,自肝细胞cDNA文库中筛选后获得了25个可能与全S蛋白发生特异性相互作用的阳性克隆,其中8个阳性克隆的猎物载体内插入基因为已知蛋白基因,分别为醛缩酶B、血清白蛋白、跳跃蛋白、纤维蛋白原α链、类蓟苦素γ家族成员6、烯酰辅酶A水合酶、2个血管上皮钙粘蛋白,3个阳性克隆为未知功能基因。将筛选出的醛缩酶B、纤维蛋白原α链、类蓟苦素γ家族成员6、烯酰辅酶A水合酶等靶基因对不同的全S基因突变体进行反向酵母双杂交,结果证明这四种宿主多肽/蛋白可以与HBV全S蛋白发生相互作用,其全S蛋白的结合区域可能位于前268 aa。结论:厦门地区HBV感染者S基因的存在可能是以全S基因形式存在;筛选并验证了4种宿主多肽/蛋白可以与HBV全S蛋白相互作用,提示HBV囊膜蛋白影响肝细胞的糖代谢、脂肪代谢、细胞增殖和纤维蛋白分泌。探索了HBV囊膜蛋白可能存在的致病机制。
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