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脑神经胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤,约占颅内肿瘤的40-50%。由于神经胶质瘤细胞浸润性生长,与脑组织无明显边界,难以全部切除,临床主要采用综合治疗,即手术后配合放射治疗、化学治疗等,可延缓胶质瘤复发,延长患者生存期。替莫唑胺(Temozolomide, TMZ)是一种烷化剂类抗肿瘤药物,临床上用于脑神经胶质瘤的治疗。该药本身没有活性,可以在生理pH条件下经非酶途径转化为活性化合物而起作用。目前TMZ上市制剂有胶囊和注射用冻干粉针。TMZ胶囊的不良反应包括恶心、呕吐、血液学反应等,通常患者在服药前先服用止吐药以避免TMZ吸收不完全。TMZ注射用冻干粉针的上市解决了手术后病人不适合服用固体药物的问题,但是TMZ注射用冻干粉针中使用吐温80,易使患者发生溶血、过敏等不良反应。因此,开发新型抗脑胶质瘤的脂质纳米给药系统以提高药效,同时降低毒副作用,提高患者顺应性成为本课题的研究重点。脂质体是指磷脂分散在水中形成的类球状的封闭囊泡,可以包载水溶性药物和脂溶性药物。作为药物载体,脂质体可在生物体内降解,无毒性和免疫原性,另外具有靶向性,可以降低毒性。因此,脂质体作为递送药物的载体已越来越受到重视并广泛应用。本课题以TMZ为模型药物,以大豆卵磷脂和胆固醇为材料,制备可静脉注射用的TMZ脂质体。本课题研究内容主要包括TMZ平衡溶解度和油水分配系数的研究,TMZ脂质体的处方和工艺筛选,TMZ脂质体的理化性质考察和体外评价,TMZ脂质体的药物动力学研究和组织分布研究。本课题研究方法和结果如下：1.TMZ平衡溶解度和油水分配系数的研究采用紫外分光光度法分别测定了TMZ在水以及pH为1.75,4.32,4.97,5.57,6.06的磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度；测定TMZ在0. lmol/L盐酸以及pH为1.75,4.32,4.98,5.57,6.06的磷酸盐缓冲液-正辛醇体系中的油水分配系数。结果表明TMZ在水以及pH为1.75,4.32,4.97,5.57,6.06的磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度分别为5.255mg/mL,6.827mg/mL,6.672mg/mL,4.586mg/mL,3.473mg/mL,3.533mg/mL。TMZ在水中及磷酸盐缓冲液中属于微溶,药物的平衡溶解度随pH的升高呈下降趋势。TMZ在0.1mol/L盐酸以及pH为1.75,4.32,4.98,5.57,6.06的磷酸盐缓冲溶液与正辛醇中的油水分配系数1gP分别为-0.603,-0.678,-0.239,0.106,0.417,1.169,油水分配系数随pH的升高而增大。TMZ在不同pH的溶液-正辛醇中的油水分配系数1gP值在-0.678-1.169之间,说明药物的脂溶性较差,水溶性一般。研究结果为替莫唑胺新剂型的处方设计,制备工艺研究及其制剂的体内外评价提供基础。2.TMZ脂质体的处方和工艺筛选采用HPLC法测定脂质体中TMZ的含量,方法学考察结果表明辅料不干扰测定,专属性强,方法灵敏简便,适合TMZ的体外测定。采用超滤离心法测定脂质体的包封率和载药量,该法可将脂质体和游离药物完全分离,操作简便,回收率高,重现性好。分别采用反复冻融法和载体沉积法制备TMZ脂质体,以粒径和包封率为评价指标,对处方和工艺进行了单因素考察,以期获得最佳处方和制备工艺。最终得出载体沉积法制备的脂质体包封率较高,粒径较小,重现性好。优化的处方和工艺为：旋蒸转速为80rpm,旋蒸温度为40℃,载体种类为山梨醇,载体与脂质比为5：1,药脂比为1：15,磷脂与胆固醇之比为8：1。根据最佳处方和工艺制备三批TMZ脂质体,其平均包封率为(35.454±1.48)%,平均载药量为(2.81±0.20)%。3.TMZ脂质体理化性质考察和体外评价通过透射电镜观察TMZ脂质体的形态,结果表明脂质体形态圆整,呈类球形,利用粒径分析仪测定脂质体的平均粒径为156.7±11.4nm,多分散系数为0.290±0.041,表明粒径分布较窄。采用pH计测得三批TMZ脂质体的平均pH为6.46±0.08,满足静脉注射的要求。采用动态膜透析法对TMZ溶液和TMZ脂质体进行了体外释放研究,结果表明TMZ脂质体组较溶液组释放缓慢,TMZ溶液体外释放行为符合Weibull equation, TMZ脂质体体外释放行为符合First-order kinetics和Weibull equation。采用2%兔血细胞悬液,对脂质体进行了初步安全性评价,试验结果表明,受试样品均未出现溶血和凝集现象,安全性较好。4.家兔体内药物动力学及小鼠体内组织分布研究本研究采用HPLC法测定家兔血浆中和小鼠组织中TMZ浓度,并进行了方法学研究。方法学考察结果表明本课题采取的HPLC测定方法简单灵敏方便,内源性物质不干扰TMZ的测定,结果准确可靠。以TMZ溶液作为对照制剂,研究了TMZ脂质体在家兔体内的药动学。与TMZ溶液相比,脂质体组的药动学参数发生了变化：t1/2β为13.465h, MRT为2.864h,分别为溶液组的的3.58倍和1.43倍；TMZ脂质体的Cmax为6.26mg/L,AUC值为14.482mg/L*h,分别为溶液组的1.10倍和1.51倍,结果表明药物在体内的循环时间延长,AUC增加有利于加强药物对肿瘤的治疗效果。以TMZ溶液作为对照制剂,研究了TMZ脂质体在小鼠体内的组织分布学。以相对摄取率(Re)作为评价指标,对TMZ脂质体的组织靶向性进行了研究,试验结果表明与溶液组相比,莫唑胺脂质体在脑中的Re值是1.22,肝和脾分别是1.337和1.306,在肾中是1.153,而在心、肺中的Re值分别是0.763和0.838,这就表明TMZ脂质体增加药物在脑中的浓度,提高药物的治疗效果,同时降低心、肺中的毒性。将TMZ制备成脂质体后,可以改变药物的体内分布,增加药物在体内的循环时间,提高靶部位的药物浓度,同时避免了上市注射用冻干粉针中吐温80的使用,降低毒副作用,提高患者用药顺应性。结论：本研究以脂质体为载体,制备了可用于静脉注射的TMZ脂质体,制备工艺简单,重现性好,理化性质稳定。体外释放试验表明,TMZ脂质体较溶液释放缓慢。初步安全性试验结果表明TMZ脂质体不会发生溶血现象,安全性较好。药动学和组织分布学研究结果可知,脂质体有一定的缓释长效作用,并具有脑靶向性,可以提高药物的疗效,降低副作用,具有开发前景。