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油菜突变体库的构建对研究油菜功能基因组学具有重要的意义。本研究通过农杆菌浸花法将激活标签载体pCB260转化到甘蓝型油菜中双11中,来构建油菜激活标签T-DNA插入突变体库。在筛选过程中,共尝试了三种筛选方法以获得快速高通量的筛选T-DNA插入突变体的方法。首先,利用除草剂Basta筛选T-DNA插入突变体。在统一规格的托盘(28×20cm)中均匀地洒上1000粒经农杆菌转化的油菜种子,放进培养箱中生长约10-15天,等长出真叶后开始喷洒5 ml/盘0.01%Basta。每隔一天喷洒一次,直到大部分非转化株死亡。将存活的转化植株转移到盆中继续生长。经PCR鉴定,在存活的34株抗性植株中,有33株为阳性植株,阳性率高达97%。其次,利用绿色荧光筛选T-DNA插入突变体。在直径为150 mm的培养皿中放入等面积的滤纸,用水将滤纸完全润湿。取1000粒经农杆菌转化后的T1代种子均匀的洒在滤纸上面,室温条件下放置12-24 h,至种芽长约3 mm左右后使用Tanon全自动化学发光/荧光图像分析系统进行荧光筛选。将筛选出的146粒带有绿色荧光的种子转移到培养箱中,提叶片基因组,PCR鉴定,有101株为阳性植株,阳性率达到69.18%。最后,改造激活标签载体pCB260,将绿色荧光蛋白基因换成红色荧光蛋白基因。因为已有实验室证明,在亚麻芥中将红色荧光蛋白作为筛选标记时,可以简单的使用绿色LED手电筒和红色太阳眼镜就能筛选出转基因的亚麻芥种子。克隆pCX-DR载体上的红色荧光蛋白基因,通过酶切连接的方法将其连接到激活标签载体pCB260上,通过农杆菌浸花法将改造后的激活标签载体转化到拟南芥中进行验证,但并没有观察到带有红色荧光的拟南芥种子。我们后续将加大转化拟南芥的数量进行验证和完整地克隆了红色荧光蛋白基因的表达框进行连接。我们将获得的转化油菜的T1代种子进行了含油量的检测,发现了3株转化株的种子含油量高于野生型和2株转化株的种子含油量低于野生型的突变体。在对T2代油菜进行观察时,我们发现了诸如少分枝、多头、早花等具有明显表型的突变体。同时,对长链酯酰辅酶A合成酶9(BnLACS9)基因的功能进行了部分研究。将BnLACS9基因的启动子克隆到含有GUS报告基因的载体pBI121上,转化拟南芥发现在根、茎、嫩叶、老叶、花和角果中均有表达,在嫩叶和花中表达最高。BnLACS9基因RNAi抑制表达植株的种子含油量降低,叶片叶绿素和淀粉的含量降低,表明了BnLACS9基因与油菜油脂和叶绿素合成相关。