论文部分内容阅读
血管内皮细胞(Endothelial cells,ECs)是血液和血管壁之间的天然屏障,调节血管收缩和凝血,分泌炎症因子并参与炎症过程,被广泛用于研究心血管相关的生理和病理过程。C-反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)是一种关联心血管疾病与炎症的重要分子,近年来越来越多的数据证明,除了 CRP,C-反应蛋白亚基(monomeric CRP,mCRP)在炎症相关的心血管疾病中也起着活跃的作用。然而离体和在体研究体系中,充斥着关于CRP和mCRP活性大量相互矛盾的报道,例如:早期动脉粥样硬化模型ApoE-/-小鼠中,低剂量长时间皮下注射CRP能够加速动脉粥样硬化的形成,而mCRP能部分的阻止斑块形成,同时mCRP通过诱导抗炎因子IL-10可发挥保护作用。而在离体细胞应答实验中,低浓度mCRP在短时间内能显著上调内皮细胞和中性粒细胞炎性细胞因子表达,显示强的促炎作用。CRP是一种血浆蛋白,游离在血液中;而mCRP主要以组织结合形式存在。实验中给C57BL小鼠静脉注射CRP和mCRP,观察到mCRP在极短的时间内就被清除出循环血液。CRP和mCRP空间分布的不同可能对发挥生理效应有直接的影响。因此,我们构建了血管内皮细胞在有孔滤器培养,形成具有极性并分别接触顶端侧(血液侧)和侧底端侧(组织侧)的细胞单层模型。在此模型中,我们发现当mCRP刺激内皮细胞顶生侧时,能引起促炎细胞因子和相关mRNA的高表达;而mCRP刺激内皮细胞侧底生侧,这种炎性应答大大降低。同时,我们用胆固醇抽提试剂破坏HCAEC细胞膜表面脂筏结构,能够有效抑制内皮细胞对mCRP的极性应答。随后,我们观察到脂筏在HCAEC膜表面呈现一种倾向顶生侧的不对称分布,这种不对称分布可能导致了内皮细胞对mCRP的极性应答。最后,我们发现NF-κB抑制剂Bay11-7082,PLC抑制剂U73122和p38 MAPK抑制剂SB20358可以不同程度的抑制人冠状动脉内皮细胞对mCRP的应答,并影响HCAEC对mCRP的极性应激。mCRP通过PLC/p38 MAPK/NF-κB通路激活冠状动脉内皮细胞,细胞膜表面脂筏的不对称分布使得内皮细胞对mCRP产生极性应答。内皮细胞以极性方式应答mCRP的阐明有助于解释现阶段mCRP在体和离体实验中诱导促炎或是抗炎应答及对动脉粥样硬化进程起保护或促进角色等的矛盾和研究。