目的:探讨心肌细胞分离、纯化和培养方法;研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)在不同心肌细胞微环境作用下,向心肌样细胞分化能力。方法:采用不同时间点,通过差速贴壁纯化、培养新生乳鼠心肌细胞。将原代乳鼠心肌细胞与BMSCs联合培养,分为:接触性联合培养组,将心肌细胞与BMSCs按2﹕1的比例种植在同一培养皿中;非接触性联合培养组,将分别种植有心肌细胞、BMSCs的盖玻片按2﹕1的比例种放入同一培养皿中共同培养;对照组,BMSCs常规培养。二周后检测各实验组细胞中,心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(cTnT)表达情况。结果:心肌细胞培养,采用差速贴壁60min组与90min组之间有统计学意义,差速贴壁60min组、90min组与差速贴壁120min组两两之间有统计学差别。免疫细胞化学鉴定:(1)接触性联合培养组细胞均表达肌钙蛋白T(cTnT);(2)非接触性联合培养组细胞均表达肌钙蛋白T(cTnT);(3)对照组细胞不表达肌钙蛋白T(cTnT)。结论:心肌细胞培养过程中,采用差速贴壁60min较差速贴壁90min、120min获得的心肌细胞数量高;接触性联合培养组与非接触性联合培养组均可将BMSCs诱导分化为心肌样细胞,对照组BMSCs无分化。