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目的:通过SPF级小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型研究溃愈散(KYS)对UC的影响,及对TLR4/MyD88/NF-κBp65信号通路的调控作用,探讨KYS治疗UC的作用靶点和机制,为其临床应用奠定实验基础。方法:采用给予含3%葡聚糖硫酸钠(DSS)饮用水的方法诱导构建溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型。将60只SPF级BALB/c雄性小鼠按体重随机分成6组:正常(Ctrl)组、模型(DSS)组、柳氮磺吡啶(SASP)组(阳性药物组)、KYS-低剂量(L)组、KYS-中剂量(M)组、KYS-高剂量(H)组,每组10只。Ctrl组给予正常饮用水15天,其余各组给予饮用水(3%DSS)连饮7天,由第8至15天给予正常饮用水。KYS-L、M、H组小鼠从第1天至第14天每天分别给予不同浓度KYS溶液(11.25g/kg、22.5g/kg、45g/kg)灌胃;SASP组小鼠每天给予0.5g/kg SASP混悬液灌胃;正常组和模型组小鼠每天给予生理盐水灌胃;每组小鼠灌胃体积一致。每天称量小鼠体重及饲料,观察并记录小鼠活动度、皮毛、大便等情况。第14天晚上对小鼠进行禁食12小时处理,于第15天取材:小鼠眼眶采血后,经颈椎脱臼法处死小鼠,置于冰上,从肛门向上截取结肠标本,测量并记下长度,以小鼠结肠制作病理检测及指标检验的样本。用疾病活动指数(DAI)评估小鼠疾病状态;用HE染色法观察结肠病理情况,用结肠长度改变、结肠黏膜损伤指数(CMDI)及组织学损伤指数(TDI)评估小鼠结肠组织损伤程度;用比色法检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性,间接反映结肠炎症情况;用ELISA法检测血清内毒素及炎性细胞因子水平、用QPCR法和Western Blot法检测炎性细胞因子及TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路相关基因、蛋白表达,比较SASP及KYS对小鼠UC的治疗效果,研究KYS是否通过调控TLR4/MyD88/NF-κB p65 信号通路治疗UC。结果:与正常组小鼠相比,模型组小鼠从造模第5天开始出现稀便、血便,皮毛光泽消失,活动度减弱,进食量及体重明显下降(P<0.05),DAI显著上升(P<0.05);取材发现模型组小鼠结肠明显缩短(P<0.05),结肠黏膜损伤严重,CMDI显著上升(P<0.05),结肠上皮黏膜结构缺损,并有大量炎性细胞浸润,TDI明显上升(P<0.05);结肠组织MPO活性明显增加(P<0.05);ELISA结果显示模型组血清LPS、TNF-α、IL-1β明显上升(P<0.05);QPCR和Western Blot结果显示结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB p65、I-κB基因、蛋白水平明显上调(P<0.05),Western Blot结果显示磷酸化NF-KB p65(p-NF-κB p65)及磷酸化I-κB(p-I-κB)水平也被显著上调(P<0.05)。而与模型组小鼠相比,SASP及KYS不同浓度组小鼠的一般情况均有改善,进食量及体重明显上升(P<0.05),DAI显著下降(P<0.05),结肠长度明显增加(P<0.05),结肠黏膜损伤恢复,CMDI显著下降(P<0.05),结肠上皮黏膜结构及炎性细胞浸润情况显著改善,TDI显著下降(P<0.05),小鼠结肠组织MPO活性被下调(P<0.05);ELISA结果显示模型组血清LPS、TNF-α、IL-1β明显下降(P<0.05);QPCR和Western Blot结果显示结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB p65、I-κB基因、蛋白水平明显下降(P<0.05),Western Blot结果显示磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)及磷酸化I-κB(p-I-κB)水平显著下调(P<0.05)。KYS-L、H组与SASP组效果无明显差异,而KYS-M组效果最佳。结论:本课题成功构建经DSS诱导的UC小鼠模型;SASP及KYS不同浓度干预均可明显改善DSS引起的UC症状,且KYS-M效果最佳并优于临床常用药SASP;DSS诱导激活TLR4/MyD88/NF-KB p65信号通路,SASP及KYS不同浓度干预均可调控该信号通路并降低炎症因子的产生,且KYS-M尤为显著;通过调控TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路可能是KYS治疗UC的机制。