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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)简称金葡菌,是一种机会性致病菌,可以引起多种疾病,同时也是导致人类食物中毒的重要病原菌,引起的食物中毒占世界第三位。由于抗生素的不合理使用,造成金葡菌耐药菌株的出现,给人类健康带来巨大的影响,引起了国内外学者的广泛关注。根据金葡菌对甲氧西林的耐药情况,可以分为耐甲氧西林金葡菌(Methicillin-resistant Staphylococeus aureus,MRSA)和甲氧西林敏感金葡菌(Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)。金葡菌的致病性和其含有的毒力因子有关。不同地区、不同来源金葡菌的耐药情况、流行菌株不同,研究菌株流行情况可以为金葡菌的预防提供参考。目的1.了解不同种类食品中含有的金葡菌耐药特点及毒力基因携带情况,比较食品来源与医院来源的菌株在耐药特点与毒力基因分布方面的差异。2.比较MRSA与MSSA菌株耐药谱、耐药基因与毒力基因携带情况,分析MRSA菌株的SCCmec分型。3.了解金葡菌的agr分型,比较不同型别携带毒力基因的差异。4.获得不同来源金葡菌的spa流行型别,了解本地区金葡菌的流行特征。方法1.根据最低抑菌浓度(MIC)对不同来源金葡菌进行临床常用8种药物的药敏检测。2.设计引物,运用PCR方法扩增不同来源金葡菌的耐药基因与毒力基因。3.多重PCR对MRSA菌株进行SCCmec分型。4.多重PCR对金葡菌进行agr分型。5.引物合成后,运用PCR扩增,对扩增产物进行双向测序拼接后,根据重复序列类型及顺序进行金葡菌的spa分型。6.统计软件SPSS21.0进行统计分析,不同来源菌株之间、MRSA与MSSA之间的耐药表型、耐药基因与毒力基因携带率的差异用χ2检验进行分析。结果1.药敏结果显示,275株金葡菌均对万古霉素敏感,其中医院、生鲜肉和米面制品来源的菌株对所选的8种抗生素中的7种呈现不同程度耐药,而肉制品和果蔬来源的对6种抗生素出现耐药。与食品分离株相比,医院来源的菌株对青霉素、红霉素、克林霉素、环丙沙星和庆大霉素等5种药物的耐药率明显较高,耐药基因acc(6’)/aph(2’’),aph(3’)-III,erm A,erm B和tet M的阳性率也比较高,ant(4’,4’’)的阳性率则比较低。食品与医院来源的菌株中毒力基因阳性率最高的都是hla基因,基因sea,seb,pvl和etb的阳性率在医院来源的菌株中明显较高,而hla和hlb则在食品来源的菌株中较高。2.MRSA总检出率是34.18%,其中医院分离株MRSA检出率为37.84%,食品分离株为29.92%,两种来源菌株MRSA检出率之间没有明显差异。在食品来源的菌株中,生鲜肉MRSA的检出率为40.00%,肉制品是17.65%,果蔬是11.11%,米面制品则是29.73%。与MSSA菌株相比,MRSA对红霉素、克林霉素、环丙沙星、庆大霉素和四环素5种药物的耐药率明显较高,耐药基因erm A,msr A和tet M的阳性率在MRSA中也比较高,而毒力基因携带率在两者中的差异没有统计学意义。3.94株MRSA菌株中有3种SCCmec型别,分别是SCCmecⅢ型(62.77%)、SCCmecⅣa型(15.96%)和SCCmecⅡ型(2.13%),还有18株未分型。其中医院和不同种类食品来源的MRSA菌株中都是SCCmecⅢ型比例最高。4.275株金葡菌中,agrⅠ型有167株(60.73%)、Ⅱ型45株(16.36%)、Ⅲ型41株(14.91%)、Ⅳ型11株(4.00%),还有11株未分型。5.医院来源菌株中流行的spa型别是t030和t437,食品来源菌株中则是t002和t091。本研究中MRSA最常见的型别是SCCmecⅢ-t030-agrⅠ型和SCCmecⅣa-t437-agrⅠ型,MSSA菌株中最常见的型别则是t002-agrⅡ型和t189-agrⅠ型。结论1.金黄色葡萄球菌耐药现象普遍存在,食品中不同来源的菌株耐药与毒力特点不同,医院来源菌株与食品来源菌株相比,耐药现象更严重,耐药基因携带率、致病性都比较高。2.MRSA与MSSA菌株相比,耐药现象明显,耐药基因携带率高,但毒力基因携带率却没有差别。MRSA菌株中SCCmec分型的流行型别是SCCmecⅢ型,不同SCCmec型别耐药谱不同,毒力基因携带率也有不同。3.金葡菌中agrⅠ型比例最高,其次是Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型,不同agr型别含有的优势毒力基因不同。4.不同来源的菌株spa流行型别不同,spa型别与agr分型之间存在某些联系。