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1、研究背景： 人55型腺病毒（Ad55）是新近出现的由人11型和14型腺病毒重组而来的新型腺病毒，人群普遍缺乏免疫力，极易在密集人群暴发流行。目前对于Ad55的研究较少。由于Ad55易于暴发流行、毒力较强且缺乏特异有效的治疗方法，故非常有必要制备并评估复制缺陷型报告病毒，为抗腺病毒药物、抗体及疫苗研究奠定基础。 2、研究目的： 获得毒性降低且适合大规模生产的复制缺陷型Ad55，在细胞水平评估其毒性、生长特性，在小鼠体内检测其诱发特异性体液免疫及细胞免疫的能力，初步评估这株病毒作为基因及重组疫苗载体的潜力。 3、研究方法： 基于实验室前期构建的已敲除E1、E3基因的Ad55质粒pAd55△E1△E3-EGFP，利用同源重组技术将其E4基因替换为Ad5E4；在293细胞中拯救、生产复制缺陷型Ad55，并利用CsCl密度梯度离心法进行纯化；利用电镜、基因组测序、考马斯亮蓝染色、质谱等技术进行鉴定。进而，采用病毒噬斑形成试验及致细胞病变效应（CPE）等方法评估复制缺陷型Ad55对不同细胞的毒力，并用定量PCR技术测定其生长能力。最后，免疫Balb/c小鼠，微量中和法检测小鼠血清特异性中和抗体，ELISPOT法检测特异性细胞免疫反应。 4、研究结果： 我们成功将Ad5的E4基因置换到Ad55的相应区域，并拯救出了能在293细胞复制的复制缺陷型重组腺病毒，这株病毒具有与复制型病毒一样的形态结构和类似的抗原蛋白成分，并能良好地表达EGFP蛋白。它能使293细胞形成病毒噬斑及产生CPE，而不能在A549等细胞系中产生类似现象。并且，与复制型病毒类似，这株复制缺陷型Ad55在293细胞中具有良好的生长能力，可以大量扩增。以其免疫小鼠能诱发较高水平的体液免疫及细胞免疫反应。 5、结论： Ad5E4基因能支持复制缺陷型Ad55的复制生长；复制缺陷型Ad55能在293及A549等细胞系中很好地表达EGFP蛋白；复制缺陷型Ad55毒力减弱但可在293细胞大量扩增生产；免疫复制缺陷型Ad55能诱发高水平的体液及细胞免疫反应；因此显示这株复制缺陷型Ad55适合作为基因及重组疫苗载体。