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Hepcidin是近年来新发现的一种调节小肠铁吸收的抗菌肽。本研究通过给3日龄仔猪注射不同剂量的右旋糖酐铁注射液构建仔猪缺铁和铁超载模型,利用实时荧光定量PCR技术研究不同铁负荷对仔猪Hepcidin基因表达量的影响,并克隆出猪Hepcidin的基因编码区,为治疗仔猪贫血和人类铁代谢疾病提供理论依据。通过给3日龄仔猪不注射或3倍量注射右旋糖酐铁构建仔猪缺铁和铁超载模型,用原子吸收法检测血清、肝脏和脾脏中铁的含量,同时对血清生化指标和氧化酶进行测定和分析。结果发现,铁超载组仔猪肝脏、脾脏和血清中铁的含量显著增加(P < 0.01),铁缺乏组中肝脏中铁的含量显著降低(P < 0.01),脾脏和血清中铁的含量分别减少了4.7倍和188倍(P > 0.05),模型构建成功;与对照组相比,铁超载组中碱性磷酸酶、白/球蛋白和甘油三酯含量显著降低(P < 0.05),总蛋白、球蛋白、总胆红素、直接胆红素、总胆固醇和高密度脂蛋白含量显著提高(P< 0.05);而铁缺乏组中碱性磷酸酶和总胆红素含量显著降低(P < 0.05),白/球蛋白和高密度脂蛋白含量显著提高(P < 0.05);铁超载组血清中丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物酶、黄嘌呤氧化酶含量显著高于对照组(P < 0.05),超氧化物歧化酶含量增加了15.76%(P > 0.05);而铁缺乏组血清中谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化物酶含量显著降低(P < 0.05),丙二醛含量比对照组降低了3.49倍(P > 0.05),超氧化物岐化酶含量比对照组提高了61%(P > 0.05)。利用实时荧光定量PCR技术研究不同铁负荷对仔猪肝脏Hepcidin mRNA表达量的影响,结果表明,缺铁组Hepcidin mRNA表达量降低113倍,而铁超载组的表达量则升高了7倍,差异极显著(P < 0.01)。本试验成功提取了仔猪肝脏的mRNA,设计引物,利用RT-PCR扩增出Hepcidin基因的编码区,纯化回收目的基因,并连接到克隆载体PMD19-T中。经质粒PCR检测,XbaⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定及DNA测序,证实插入片段的DNA序列与Genebank中已经公布的猪Hepcidin基因序列的同源性达100%,编码82个氨基酸,预测的蛋白分子量和等电点分别为8.76 kDa和9.06,与已知牛的Hepcidin序列同源性达81.71%,不同物种Hepcidin蛋白具有高度的保守性,Hepcidin蛋白物种进化树符合物种进化规律。