本研究运用细胞培养、RNA干扰、Western blotting等细胞学分子生物学技术，初步研究了鱼藤酮诱发神经细胞死亡过程中mTOR信号通路的变化，探讨了鱼藤酮诱导ROS和胞内Ca2+升高通过mTOR通路导致神经细胞死亡机理，为防止鱼藤酮诱发的神经变性相关疾病提供科学的指导和依据。具体结果如下：　　1.鱼藤酮通过抑制mTOR通路诱导神经细胞死亡研究　　PC12细胞或分离的小鼠原代神经元悬液接种于6孔培养板或96孔培养板中，以不同浓度鱼藤酮(0.05、0.1、0.3、0.5和1μM)处理神经细胞24 h，或用1μM鱼藤酮处理神经细胞为0-48 h，观察鱼藤酮处理神经细胞的最适时间和浓度。用腺病毒干扰过表达mTOR或持续激活S6K1，论证鱼藤酮对mTOR及其下游蛋白S6K1和4E-BP1影响与其诱导神经细胞死亡的关系。检测指标有，MTT法分析细胞活性，Western Blotting分析细胞中mTOR介导的S6K1和4E-BP1磷酸化表现。结果显示，鱼藤酮诱导神经细胞死亡明显的适宜浓度为0.5和1μM，时间在24 h后；鱼藤酮抑制S6K1和4E-BP1的磷酸化以浓度依赖的方式逐渐下降，用1μM鱼藤酮处理PC12细胞和原代神经元可见48 h内S6K1和4E-BP1磷酸化水平也随时间增加而下降，在24 h后呈显著抑制表现；mTOR过表达或持续激活S6K1表达部分地阻止鱼藤酮诱导的神经细胞死亡。提示：鱼藤酮通过抑制mTOR通路诱导神经细胞死亡。　　2.鱼藤酮诱发ROS和胞内Ca2+升高导致神经细胞死亡与mTOR通路抑制关系探讨　　PC12细胞或分离的小鼠原代神经元悬液接种于6孔培养板或96孔培养板中，以不同浓度鱼藤酮(0.05、0.1、0.3、0.5和1μM)处理神经细胞24 h或36 h；或用2.5 mMNAC预处理PC12细胞1 h后，再用0.5和1μM鱼藤酮处理为24 h；或用腺病毒干扰PC12细胞过表达mTOR，然后用0.5和1μM鱼藤酮处理该细胞。采用荧光探针CM-H2DCFDA分析细胞ROS水平；选用荧光探针Fluo-3/AM通过荧光比色法分析细胞内ca2+强度；MTT评估细胞活性；Western blot分析蛋白变化。我们发现，鱼藤酮诱导ROS关联mTOR通路抑制导致神经细胞死亡，这被NAC阻止鱼藤酮诱导PC12细胞活性和S6K1磷酸化下降证据支持；鱼藤酮诱导神经细胞[Ca26]i升高和CaMKⅡ激活；mTOR过表达明显阻止鱼藤酮诱导神经细胞CaMKⅡ激活。提示：鱼藤酮诱发ROS和胞内Ca2+升高导致神经细胞死亡与mTOR通路抑制有关系。