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第一部分纳米化Photosan的制备与表征目的制备负载光敏剂Photosan的空心氧化硅纳米粒子(以下简称纳米化Photosan),并初步探讨纳米化Photosan的表征。方法采用一步湿化学方法制备负载Photosan的空心氧化硅纳米粒子。结果成功制备了负载Photosan的空心氧化硅纳米粒子。结论采用一步湿化学方法成功制备了负载Photosan的空心氧化硅纳米粒子,实现了光敏剂Photosan的纳米化。第二部分普通Photosan及纳米化Photosan对体外培养人胆囊癌细胞GBC-SD的光动力灭活作用目的观察普通Photosan和纳米化Photosan对体外培养人胆囊癌细胞GBC-SD的光动力灭活作用。对比普通Photosan和纳米化Photosan的治疗效果及最佳治疗参数。方法1.倒置显微镜下随时观察GBC-SD细胞治疗前后的形态变化以及生长状况。2.MTT比色分析法测定普通Photosan及纳米化Photosan对胆囊癌细胞系GBC-SD的杀伤作用。3.Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡与坏死。结果1.普通Photosan-光动力疗法(PDT)治疗后4小时即出现GBC-SD细胞生长状况欠佳;纳米化Photosan-PDT治疗后2小时出现GBC-SD细胞生长状况欠佳。治疗后48小时细胞几乎全部死亡。2.MTT比色分析法测定显示:1)单纯使用光敏剂或单纯使用光照均不能对GBC-SD细胞的生长产生抑制作用;2)相同参数设置下纳米化Photosan较普通Photosan对GBC-SD细胞的生长抑制作用更强;3)各自最佳参数设置下纳米化Photosan较普通Photosan对GBC-SD细胞的生长抑制作用更强;4)纳米化Photosan比普通Photosan对GBC-SD细胞的生长抑制作用起效更快。3. Annexin V-FITC/PI双标记法检测显示,普通Photosan-PDT和纳米化Photosan-PDT对GBC-SD细胞的杀伤作用均以细胞凋亡为主;在各自最佳参数设置下,纳米化Photosan-PDT比普通Photosan-PDT引起的GBC-SD细胞总凋亡坏死率高。结论1.普通Photosan及纳米化Photosan均需要配合光照才能发挥光动力疗法的治疗效果。2.纳米化Photosan-PDT比普通Photosan-PDT对人胆囊癌细胞系GBC-SD有更强、更快的杀伤作用。3.普通Photosan-PDT和纳米化Photosan-PDT对GBC-SD细胞的杀伤作用均以细胞凋亡为主。第三部分Photosan及纳米化photosan对胆囊癌移植瘤的光动力疗效目的建立裸鼠人胆囊癌GBC-SD荷瘤模型,研究普通Photosan及纳米化Photosan光动力疗法对肿瘤生长的抑制作用。方法1.建立裸鼠人胆囊癌GBC-SD细胞移植瘤模型。2.观察普通Photosan及纳米化Photosan对裸鼠人胆囊癌移植瘤的光动力治疗效果及对裸鼠的不良反应。结果1.人胆囊癌GBC-SD细胞接种成功率100%,10-12天肿瘤体积达0.1-0.15cm。2.从PDT治疗后2天起治疗组(普通Photosan-PDT治疗组及纳米化Photosan-PDT治疗组)与对照组肿瘤体积就存在着统计学差异,而普通Photosan组与纳米化Photosan组比较从PDT治疗后第6天开始出现统计学差异。治疗组裸鼠移植瘤的重量显著小于对照组,且纳米化Photosan组显著小于普通Photosan组,均有统计学意义。3.普通Photosan-PDT及纳米化Photosan-PDT治疗仅使裸鼠发生短暂表皮细小糠屑样物。结论1.普通Photosan及纳米化Photosan均对人胆囊癌荷瘤裸鼠模型中肿瘤的生长有明显的抑制作用,后者对胆囊癌的杀伤效果明显优于前者,起效时间明显早于前者。2.普通Photosan及纳米化Photosan给药后裸鼠无严重短期不良反应发生。第四部分纳米化Photosan光动力治疗胆囊癌凋亡途径的探讨目的探讨纳米化Photosan光动力治疗胆囊癌的凋亡途径。方法1.实时荧光定量PCR检测survivin、Bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶-8、-9(caspase-8、caspase-9)基因mRNA水平的改变。2. Western-blot免疫印迹法检测survivin、Bcl-2、caspase-8、caspase-9蛋白的表达差异。结果实时荧光定量PCR检测及Western-blot检测均显示:纳米化Photosan-PDT治疗后,survivin在治疗早期表达明显下调,治疗晚期表达明显上调;Bcl-2在治疗早期和治疗晚期表达均明显下调;caspase-8治疗早期和治疗晚期的表达与对照组无显著差异;caspase-9在治疗早期表达明显上调,治疗晚期表达明显下调。结论1. caspase-9依赖的线粒体途径可能是纳米化Photosan光动力治疗诱导GBC-SD细胞凋亡的主要途径。2. caspase-8介导的外源性凋亡途径可能不是纳米化Photosan光动力治疗引起GBC-SD细胞凋亡的主要途径。3. survivin可能在纳米化Photosan光动力治疗时参与caspase-9依赖的线粒体途径诱导GBC-SD细胞凋亡。4.Bcl-2在纳米化Photosan光动力治疗GBC-SD细胞过程中可能参与复杂的凋亡途径。