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Neuromedin U(NMU)在结构上是一个高度保守的神经肽,最初分离自猪的脊髓,有NMU-25和NMU-8两种。NMU在胃肠道(GI)等外周组织器官和中枢神经系统(CNS)均有分布。NMU能与两个G蛋白偶联受体(NMU-R1和NMU-R2)结合而发挥作用,NMU-R1主要在外周组织器官内表达,而NMU-R2主要在中枢神经系统中表达。NMU及其受体在体内多种组织器官中的表达,赋予了其众多的功能,具有刺激平滑肌收缩、调节摄食和能量平衡、影响HPA轴、应激和免疫等生物学作用。然而,NMU目前的研究主要集中于人类,大鼠,小鼠和猪等,有关兔NMU及其受体的研究文献中鲜见报道。因此,我们用RT-PCR方法研究了兔NMU及其受体基因的克隆和表达,以及热应激对下丘脑、垂体、肾上腺和睾丸NMU、NMU-R1和NMU-R2mRNA表达的影响。研究结果如下:(1)兔NMU、NMU-R1和NMU-R2的基因克隆本文用PCR方法克隆了兔NMU、NMU-R1和NMU-R2基因片段,其大小分别为443,366和203 bp,并将基因序列提交到GenBank数据库(GenBank ID:kp276160.1,km-236787.1 和 km-236788.1)。(2)兔NMU及其受体氨基酸序列的生物信息学软件分析将本文克隆的兔NMU、NMU-R1和NMU-R2核苷酸序列与其他物种如人类、猪、鼠、牛、绵羊和大鼠相比有很高的同源性,分别为(83%,80%,78%,83%,80%,78%),(87%,84%,81%,80%,86%,80%)和(85%,89%,80%,83%,89%,82%);所预测的氨基酸序列同源性分别为(84%,75%,73%,73%,74%,72%),(84%,78%,75%,84%,83%,75%)和(87%,90%,75%,87%,88%,76%)。兔NMU-R1和NMU-R2氨基酸序列有一个典型的G蛋白偶联受体跨膜结构。NMU、NMU-R1和NMU-R2基因分别定位于第2号、3号和1号染色体上。(3)NMU、NMU-R1和NMU-R2基因在兔体内的表达RT-PCR结果表明,NMU、NMU-R1和NMU-R2 mRNA在中枢神经系统和外周组织器官均有表达,NMU mRNA在外周组织中表达更丰富。NMU mRNA在回肠、睾丸、肝、直肠和下丘脑高表达,在十二指肠、海马、结肠、腮腺和肾上腺中等表达,在研究的其他组织低表达。NMU-R1 mRNA主要在胃肠道表达,如肝、结肠、回肠、盲肠和圆小囊,在脑桥、下丘脑和脊髓中等表达,在小脑低表达。NMU-R2 mRNA在下丘脑、脊髓、小脑、海马、脾、肾、结肠、回肠、下颌腺、腮腺和肾上腺高表达,在空肠、圆小囊、胃和子宫中等表达,在其他研究的组织低表达。(4)热应激对NMU、NMU-R1和NMU-R2 mRNA表达的影响实时荧光定量PCR结果显示,热应激后,NMU、NMU-R1和NMU-R2mRNA在下丘脑、垂体、肾上腺和睾丸均有表达,但其表达变化的模式不尽相同,下丘脑NMU,NMU-R1和NMU-R2 mRNA表达上调的变化早于垂体、肾上腺和睾丸,以便对应激作出迅速的反应,进而调节HPA轴的功能。本研究为进一步研究兔NMU及其受体的生理功能及机制提供了实验数据。