论文部分内容阅读
目的分析本地区汉族马凡综合征（Marfan syndrome, MFS）患者的原纤维蛋白-1（Fibrillin-1, Fib-1）基因（FBN1）、转化生长因子-β受体2（Transforming growth factor beta receptor typeⅡ, TGFBR2）基因和转化生长因子-β受体1 （Transforming growth factor beta receptor TypeⅠ, TGFBRI）基因突变情况,能够进一步明确相应MFS患者的发病原因,并可为他们家系成员的症状前检测或下一代的产前筛查提供依据。方法应用聚合酶链反应（PCR）和变性高效液相色谱法（Denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC）对MFS先证者的FBN1、TGFBR2和TGFBR1进行突变筛查,然后对DHPLC初筛异常的DNA片段进行测序分析。在检出突变位点后,对先证者家系成员和随机采集的120例正常对照的相应DNA片段进行DHPLC筛查和序列分析,同时分析新发突变的突变位点与蛋白结构域的关系,以及通过蛋白三维结构模拟的方法对新发现的突变进行致病性分析。结果1.在9例无血缘关系的MFS先证者中发现FBN1的4种致病性突变（其中2种为新的突变）具体为：（1）第55号外显子的复合突变,包含第55号外显子的缺失突变c.68626871delGGCTGTGTAG （p.Gly2288MetfsX109）、同义突变c.6861A>G和内含子的突变c.[ⅣS55+1ⅣS55+11delGTAAGAGGATC;ⅣS55+34dup CATCAGAAGTGACAGTGGACA],为新的突变。（2）第20号外显子2462位碱基发生置换（c.2462G>A）,造成错义突变（p.Cys821Tyr）,为新的突变。（3）第46号内含子+5位碱基发生置换（c.ⅣS46+5G>A）,造成剪接位点的改变,为已报道的突变。（4）第27号外显子3373位碱基发生置换（c.3373C>T）,造成无义突变（p.Arg1125X）,为已报道的突变。2.先证者家系成员中,患者检出与先证者相同的突变,健康者和120例正常对照均未发现相同的突变。3.突变位点与蛋白结构域的关系分析显示：两种新发现的突变p.Gly2288MetfsX109和p.Cys821Tyr均位于Fib-1重要的结构域即钙结合类表皮生长因子（Calcium binding epidermal growth factor-like, cbEGF）基序上,且都使得该结构域上高度保守的半胱氨酸残基产生不同程度的改变。4.蛋白三维结构进行模拟显示：p.Gly2288MetfsX109和p.Cys821Tyr突变均导致蛋白三维结构发生了不同程度的变化。此外,也发现了FBN1的6种单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms, SNPs）:c.3442C>G （p.Prol148Ala）、c.ⅣS34-10C>T、c.ⅣS 41-22 insT、c.ⅣS45+29insT、c.ⅣS56+17C>G和c.ⅣS62+8A>C,其中c.ⅣS34-10C>T、c.ⅣS 41-22insT为新发现的SNPs。未发现TGFBR2和TGFBR1的突变。结论1.FBN1的缺失突变c.[68626871delGGCTGTGTAG;ⅣS55+1ⅣS55+11del GTAAGAGGATC]（p.Gly2288MetfsX109）、错义突变（p.Cys821Tyr）、剪接位点突变（c.ⅣS46+5G>A）和无义突变（p.Arg1125X）很可能是相应MFS患者的致病原因。2.FBN1、TGFBR2和TGFBR1突变筛查,能够进一步明确相应MFS患者的发病原因,并可为他们家系成员的症状前检测或下一代的产前筛查提供依据。3. DHPLC是一种高效、简便、经济、可靠的基因突变筛查方法,适用于大规模的基因突变筛查。4.与MFS相关的基因除了FBN1、TGFBR2和TGFBR1外,可能还存在其他的候选基因。