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目的：研究IFN-γ和TNF-α对NOD/Ltj小鼠胰岛细胞及胰岛瘤细胞株MIN6凋亡的影响。方法：1. IFN-γ和TNF-α对NOD/Ltj小鼠胰岛细胞活性的影响：分离NOD/Ltj小鼠胰岛细胞，分别用IFN-γ单独或与TNF-α联合刺激细胞，MTT法分析细胞活力的变化。2. IFN-γ和TNF-α对NOD/Ltj小鼠胰岛瘤细胞系MIN6活性的影响：贴壁培养MIN6细胞，分别用IFN-γ、TNF-α和IFN-γ+TNF-α刺激细胞，MTT法分析MIN6细胞活力的变化；倒置显微镜下观察分组刺激后MIN6细胞的形态学变化；Hoechst染细胞核后，激光共聚焦显微镜下观察MIN6细胞核形态变化；提取MIN6细胞的DNA，琼脂糖凝胶电泳，检测DNA凋亡的片段大小情况；流式细胞术检测细胞因子IFN-γ和TNF-α对MIN6细胞凋亡的影响。免疫印迹法检测早期凋亡的MIN6细胞中caspase-3的表达情况。结果：1.MTT法分析结果显示，刺激48h后，IFN-γ对NOD/Ltj小鼠胰岛细胞有毒性作用，并且IFN-γ与TNF-α联合刺激对胰岛活力有明显的抑制作用。2.MTT法分析显示，单独IFN-γ或TNF-α对MIN6细胞有一定的毒性作用，两者联合对MIN6细胞活力的抑制具有协同作用，并呈现明显的时间依赖性（P＜0.05）。倒置显微镜下观察到未处理组的细胞形态伸展良好，呈瓦片状。IFN-γ和TNF-α联合刺激12h，24h和48h后，细胞形态从不规则的方形瓦片状变化成圆球状，最后部分细胞开始漂浮。激光共聚焦显微镜下观察到IFN-γ或TNF-α单独作用MIN6细胞，其细胞核形态与对照组相比差异性不明显；但是二者同时作用时，MIN6细胞的细胞核表现出明显的细胞核皱缩、染色质浓缩等细胞凋亡特征。琼脂糖凝胶电泳结果发现IFN-γ和TNF-α单独刺激MIN6细胞48h后，与对照组比较，DNA有明显的凋亡片段；其联合刺激时，凋亡片段更多。流式细胞仪检测结果表明细胞因子IFN-γ和TNF-α对MIN6细胞的毒性具有显著的协同作用，并且IFN-γ和TNF-α对MIN6细胞的毒性主要是诱导MIN6细胞的早期凋亡而不是坏死或者晚期凋亡。免疫印迹实验表明IFN-γ和TNF-α降低了MIN6细胞中caspase-3的表达。结论1.细胞因子IFN-γ对小鼠胰岛细胞有毒性作用，IFN-γ与TNF-α联合刺激时，作用更明显。2.细胞因子IFN-γ和TNF-α对MIN6细胞具有毒性作用，并呈现明显的时间依赖性；当细胞因子IFN-γ和TNF-α联合刺激MIN6细胞时，其毒性作用显著增强，具有协同作用，其对MIN6细胞的毒性作用是诱导其早期凋亡而不是坏死或者晚期凋亡。3. IFN-γ和TNF-α通过下调Caspase-3的表达来诱导MIN6细胞的早期凋亡。