烟曲霉是一种广泛存在于自然界中的腐生真菌,它是一种条件致病菌,因其导致肺炎和侵袭性传播疾病,造成较高的死亡率。科学家和临床医生越来越关注烟曲霉的毒力,许多证据表明毒力特性与真菌细胞表型变化相关。比如孢子的大小、菌丝生长速率、附着力、细胞表面的疏水性等。在本论文中我们通过正向遗传和反向遗传的方法,研究毒力相关基因。正向遗传我们通过利用农杆菌随机插入突变,并结合PCR技术确定AfcpcB这一基因;反向遗传我们通过同源蛋白比对分析确定了Afcup2这一高铜响应相关基因。并且利用同源重组的原理分别进行基因敲除,研究其生物学功能。CpcB（Cross Pathway Control B）是酵母Cpc2及哺乳动物RACK1的同源蛋白。前人研究已经证实AfCpcB对于正常的产孢和生长是必需的。但是曲霉中关于AfCpcB与毒力关系,及作为预测的Gβ-like蛋白与Gα蛋白相互关系目前均没有报道。在本文中我们证明胞质定位的AfCpcB属于Gβ-like蛋白家族蛋白,ΔAfcpcB表现为毒力减弱,而且ΔAfcpcBΔAfgpaB双敲菌株表现为类似ΔAfgpaB多隔表型,加剧ΔAfcpcB产孢缺陷,同时伴随着白色蓬松的菌落形态。加剧的产孢缺陷表明AfcpcB与Gα亚基AfgpaB或G蛋白复合物相比具有自己独特的功能。同源蛋白互补实验表明酵母同源蛋白与AfCpcB在生长上具有保守的的功能;产孢方面功能存在差异;曲霉中构巢曲霉曲霉与AfCpcB蛋白功能保守性非常好,功能上可以替换。AfCpcB通过SMART软件预测分析显示其包含七个WD domain。我们通过缺失突变证明WD domain是其生长所必需的,WD domain常常起始于GH终止于WD氨基酸。接着我们的GH motifs点突变实验证明其前三个WD domains中GH motif对于生长所必需的。同时我们发发现AfCpcB不仅产孢和生长调控功能依赖于GH motif,而且多药抗性的表型也依赖于GH motif。小鼠毒力实验表明WD1GH,AE菌株和ΔAfcpcB一样均表现为毒力减弱。另一方面,我们依据高铜敏感这一毒力相关表型,进行同源蛋白比对分析,我们确定烟曲霉可能的高铜响应基因Afcup2,通过基因敲除技术我们产生ΔAfcup2菌株,ΔAfcup2表现为高铜敏感表型;通过点突变和缺失突变技术我们确认“C”和“KGRP”及“RGHR”motifs对于AfCup2所介导的高铜响应是必需的;我们通过转录组测序比对分析,确定在高铜响应情况下基因的mRNA量的显著变化的基因,并且高调其中变化最为明显地一个Afccc2,结果显示可以完全恢复高铜敏感的缺陷表型,我们认为Afccc2可能是AfCup2的下游靶;利用两种免疫抑制的方法分别进行毒力测试,结果都显示ΔAfcup2极大地降低小鼠的毒性。