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背景和目的肺癌是恶性部肿瘤中排名首位的致死性肿瘤,是肺上皮细胞过度恶性增殖所致。肺腺癌占肺癌所有发病率的60%以上,并且近年来随着精细影像学的发展检出率逐年增加。肺腺癌的发生主要由机体内正常肺泡上皮细胞在众多内因(包括遗传、内分泌、癌基因激活和抑癌基因失活等)以及众多外因(物理、化学、生物等)作用下发生转化获得过度增殖能力。WHO的肺腺癌分为原位癌,微浸润性癌和浸润性癌,三者的诊断和鉴别诊断直接影响患者的治疗和预后。肺腺癌的治疗主要包括手术、放射治疗、冷冻切除及热消融去除局部肿瘤组织,针对肺腺癌的化疗采取含铂为主的两药全身化疗。然而,手术治疗对患者自身的心肺功能状况要求较高,即使采取根治性切除术也无法避免肿瘤的复发及转移;放射治疗、冷冻切除、热消融及化疗均有对正常细胞功能的较大损伤有一定的局限性。随着分子生物学的深入研究,肺腺癌的治疗获得了巨大进展,通过驱动基因检测制定的靶向治疗、抗血管肿瘤药物治疗以及PD-L1免疫治疗等方式的应用,虽然改善了部分肺癌患者的治疗效果,但是目前肺腺癌患者的总体生存期仍没有显著改善。越来越多的研究证实肿瘤的进展不仅有肿瘤细胞参与,也与肿瘤细胞及其周围成分组成的微环境有关,其中微环境中主要成分成纤维细胞作为细胞外基质主要成分,主要以活化状态的细胞参与肿瘤演进过程,其活化状态称为肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)。与正常组织中的成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)相比具备间质性蛋白表达增加、通过糖酵解增加乳酸含量以加强肿瘤细胞能量供应、参与肿瘤血管生成、促进肿瘤侵袭及转移,甚至与肿瘤耐药及复发有关。因此将CAFs作为潜在的治疗突破点,对于肿瘤患者预后具有重要意义。成纤维细胞活化蛋白(.Fibroblast activation protein,FAP)是一种II型跨膜丝氨酸蛋白水解酶,在肺癌、食管癌、原发性肝癌、乳腺癌及结直肠癌等实体肿瘤中选择性表达于CAFs上,除了在胚胎组织中,FAP在正常组织中几乎不存在,并且有研究证实FAP的表达与肺癌的浸润程度、淋巴结转移成正相关,与其预后成负相关,并有体外模型验证下调FAP胃癌细胞的增殖得到抑制[1]。失活CAFs调控基因使恶性前列腺肿瘤微环境得以重塑,肿瘤细胞的侵袭、迁移和肿瘤血管生成均受到明显抑制。这使得FAP可能作为特异性靶点应用于肿瘤新的治疗方法中。人平足蛋白(podoplanin,PDPN)是一种1型跨膜唾液酸昔样糖蛋白,由一个胞外结构域、一个单跨膜部分和一个用于蛋白激酶C和cAMP磷酸化的短胞质尾组成。已检测到在肺癌、胃癌及乳腺癌中等的肿瘤中表达,测定在胰腺癌间质中PDPN(+)表达对不同化疗药物展现出具有差异的药物效果[2]。在肿瘤微环境中PDPN与CD204细胞的表达表现出一致性,表示其可能免疫反应有关,以往PDPN在组织病理学中被广泛用作淋巴管内皮的特异性标记物,在肺鳞癌中PDPN(+)与淋巴结转移有关,并有学者证实PDPN可作为肺腺癌独立预测复发的因素。但是其具体基因机制及靶点治疗还未明确。因此,本研究首先获取肺腺癌癌组织及癌旁组织,通过免疫组织化学方法测定FAP蛋白及PDPN蛋白在CAFs中的表达,分析FAP及PDPN对肺腺癌淋巴结转移、胸膜转移及远处转移和预后的影响,评价两者在肺原位癌,微浸润性癌和浸润性癌的鉴别诊断价值,CAFs与肿瘤细胞之间的相互作用,从而得出可行性理论基础应用于肿瘤的病理诊断及临床治疗。材料与方法选择2014年2月14日至2014年12月28日在山东大学山东省立医院首诊且接受根治性肺癌切除术的患者共141例,患者筛选条件为术后病理明确证实为肺腺癌且小于等于3cm的小结节。对141例标本进行免疫组织化学染色,检测其CAFs在肿瘤中的比例、以及CAFs中FAP蛋白与PDPN蛋白的表达,分析FAP与PDPN在CAFs及NFs中表达的差异,分析与淋巴结转移等多种临床病理因素之间的关系以及与患者临床预后的关系。结果1.CAFs在肺腺癌组织中比例与肿瘤的发生发展相关制备肺腺癌及癌旁组织HE切片,光学显微镜下观察CAFs呈长梭形,与NFs相比,CAFs形态不均一,增殖能力较强,取肿瘤最大切面,计算CAFs单位体积的镜下的数量和比例,结果显示CAFs是细胞数明显比NFs多。2.FAP、PDPN促进肺腺癌细胞浸润及转移能力、与肺癌不良预后有关本研究免疫组织化学染色结果显示,PDPN蛋白仅在肺浸润性腺癌中表达,FAP、PDPN在肺腺癌CAFs中的表达较NFs组织中明显高,且与淋巴结转移、不良预后成正相关。3.FAP阳性表达与PDPN阳性表达成正相关。结论1.肺腺癌CAFs中FAP蛋白与PDPN蛋白都较正常肺组织表达增高,并且PDPN仅在肺浸润性腺癌中高表达,可作为浸润性腺癌的诊断辅助分子指标,推测FAP蛋白与PDPN蛋白与肺腺癌发生有关。2.FAP蛋白与PDPN蛋白与肺腺癌临床分期、淋巴结转移、胸膜转移及远处转移有关;与年龄、吸烟,切缘阴阳性无明显关系。可作为预测肺癌预后的特异性指标3.FAP蛋白与PDPN蛋白在肺浸润性腺癌中的表达呈正相关。预测其可能作为联合指标预测肺癌进展。