为提升刺梨叶质量标准,本实验逐一完善质量标准中得各项内容,建立了刺梨叶总多酚、总黄酮含量测定方法,并基于不同极性部位提取物抗氧化能力制备供试液,建立刺梨叶指纹图谱。以期为刺梨叶源药材的质量稳定可控提供科学依据。本实验对刺梨果总多酚提取工艺进行了研究。在刺梨果前处理中考察了不同的干燥方式对刺梨果总多酚的影响,采用响应面分析方法优化了刺梨果总多酚的提取条件,并初步探索了刺梨果多酚提取物的纯化工艺,为产品开发提供参考。主要研究如下:1刺梨叶质量标准提升【鉴别】完善了原标准中薄层鉴别项,以异槲皮苷为对照品,聚酰胺薄膜为固定相,展开剂为甲酸:乙酸乙酯:甲苯(1:2:1),显色剂为3%AlCl3-乙醇溶液,在与异槲皮苷相同位置荧光斑点。【检查】参照2015版药典方法测定水分,总灰分,酸不溶性灰分,水浸出物,60%乙醇浸出物。各检查项限度暂定为水分不超过9.0%,总灰分不超过7.0%,酸不溶性灰分不超过0.6%,水浸出物不少于26.6%,60%乙醇浸出物不少于32.8%。采用AFS933型非色散原子荧光光谱法测定汞、砷,采用ZEEnit 700P型石墨炉原子吸收光谱法测定铅、镉。重金属含量均很低,未纳入标准。【含量测定】通过正交实验设计优化刺梨叶总黄酮、总多酚含量测定的显色条件,建立了刺梨叶总多酚和总黄酮的含量测定方法。测定了36批刺梨叶样品总多酚和总黄酮含量测定,平均含量分别为11.62%和1.48%,暂定总多酚含量限度为不少于8.7%,总黄酮含量限度为不少于1.1%。【指纹图谱】供试品制备通过对刺梨叶不同极性部位的抗氧化活性比较(以DPPH自由基清除率和总抗氧化力为评价指标),确定正丁醇层提取物的抗氧化能力最强,故选择刺梨叶正丁醇层进行指纹图谱研究。色谱条件Phenomenex Gemini 5u C18(110A 250×4.6mm)为色谱柱,0.1%的磷酸水和乙腈为流动相,梯度洗脱,波长270 nm,柱温30℃,流速1 mL·min-1。对样品进行指纹图谱测定,结果运用聚类分析,将样品分为2015年和2016年两类,春季样品明显区别于其他样品;运用主成分分析得到5个主成分。将360 nm下的图谱共有特征峰进行聚类分析,结果验证了以上结果。2刺梨果总多酚提取工艺研究(1)干燥工艺研究以总多酚为参考因素,比较减压干燥、常压烘箱干燥和冷冻干燥三种处理方式对刺梨鲜果中总多酚的影响,减压干燥和冷冻干燥两种方式对刺梨果总多酚的含量影响最小。(2)提取工艺优化采用单因素考察和响应面分析方法优化刺梨果总多酚提取工艺,优选出最佳组合提取条件:提取时间48 min、乙醇百分数60%、液料比16:1,实验提高了刺梨果中多酚类物质的提取率。(3)用乙酸乙酸萃取刺梨果提取物,对刺梨果总多酚纯化工艺进行初步探索,将刺梨果总多酚纯度由22.2%提升至41.7%。