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第一部分半夏泻心汤对3-脱氧葡萄糖醛酮诱导骨骼肌胰岛素抵抗干预作用及其机制研究目的:研究半夏泻心汤对3-脱氧葡萄糖醛酮(3-deoxyglucosone,3DG)诱导大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响。方法:将SD大鼠按体重随机分为3组:空白对照组、3DG组(3DG,50 mg/kg)、半夏泻心汤组(50 mg/kg 3DG+10 g/kg半夏泻心汤),每组10只,每天灌胃给药1次,共2周。给药2周后,进行空腹血糖以及口服糖耐量试验(Oral glucose tolerance test,OGTT)以及曲线下面积(Area Under Curve,AUC);提取大鼠血清,ELISA法检测餐后血清胰岛素水平;提取大鼠骨骼肌膜蛋白和总蛋白,Western Blot法分别检测骨骼肌膜上的葡萄糖转运蛋白 4(Glucose transporter 4,GLUT4)、胰岛素受体蛋白-β(Insulin receptor-β,IR-β)各组蛋白表达量。结果:空腹血糖实验结果表明:与3DG组比较,半夏泻心汤显著降低空腹血糖水平(P<0.05);口服糖耐量实验结果表明:与3DG组比较,半夏泻心汤能够显著降低在30 min、60 min时间点时的大鼠血糖水平(P<0.05)。口服糖耐量曲线下面积(AUC)结果表明3DG组AUC明显高于正常组(P<0.05),半夏泻心汤组AUC显著低于3DG组(P<0.05)。ELISA实验结果表明:与3DG组比较,半夏泻心汤能够显著增加大鼠餐后血清胰岛素水平(P<0.05)。Western Blot 结果显示:与空白组相比,3DG 组 GLUT4、p-IR-β、IR-β蛋白表达显著均降低(P<0.05);与3DG组比较,半夏泻心汤能够显著上调骨骼肌GLUT4、p-IR-β、IR-β蛋白表达水平(P<0.05)。结论:3DG致大鼠糖调节受损(Impaired glucose regulation,IGR)。3DG可下调骨骼肌胰岛素信号通路IR-β、p-IR-β、膜GLUT4蛋白表达水平,是3DG致胰岛素抵抗的可能机制。半夏泻心汤可改善3DG致大鼠糖调节受损,上调骨骼肌胰岛素信号通路p-IR-β、IR-β、膜GLUT4蛋白表达,促进骨骼肌葡萄糖摄取,从而改善3DG大鼠胰岛素抵抗。第二部分半夏泻心汤含药血清对3-脱氧葡萄糖醛酮诱导L6细胞胰岛素抵抗的作用及其机制研究目的:探讨半夏泻心汤含药血清对3DG诱导的L6细胞胰岛素抵抗的作用。基于PI3K-Akt信号通路,研究半夏泻心汤通过干预3DG诱导L6细胞胰岛素抵抗分子作用机制。方法:探索3DG诱导L6细胞抑制糖摄取的浓度和时间。探索半夏泻心汤含药血清改善3DG诱导的L6细胞糖摄取受损最佳浓度。通过MTT法检测细胞活力、检测2-NBDG荧光强度评价细胞葡萄糖摄取能力。Western Blot法分别检测L6细胞膜上的GLUT4、PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达。结果:与对照组相比,3DG干预24小时后,L6细胞的葡萄糖摄取能力下降,当3DG浓度达到300ng/ml时葡萄糖摄取能力明显降低(P<0.05)。与3DG组相比,当半夏泻心汤含药血清在5%时葡萄糖摄取量明显增加(P<0.001)。与空白对照组相比,3DG组p-IR、PI3K-p110、p-Akt、膜GLUT4蛋白的表达量显著降低(P<0.001);与3DG组比较,半夏泻心汤组p-IR、PI3K-p110、p-Akt、膜GLUT4蛋白的表达量明显增加(P<0.05)。结论:3DG可通过损害IR/PI3K/Akt信号通路,进而抑制胰岛素刺激的GLUT4转位,致骨骼肌L6细胞膜GLUT4蛋白表达下调,引起骨骼肌L6细胞葡萄糖摄取降低。半夏泻心汤可能通过上调3DG-L6细胞IR/PI3K/Akt信号通路中p-IR、PI3K-p110、p-Akt蛋白表达,进而促进胰岛素刺激的GLUT4转位,致骨骼肌L6细胞膜GLUT4蛋白表达上调,改善3DG-L6细胞葡萄糖摄取降低。