槲寄生碱对人肺腺癌A549细胞抑制作用的实验研究

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目的:通过体外和体内实验研究槲寄生碱对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,并初步探讨作用机制,科学评价槲寄生碱的急性毒性。方法:在体外实验中,采用CCK-8试剂盒检测槲寄生碱作用A549细胞的IC50值,绘制生长曲线观察槲寄生碱作用后A549细胞生长情况;利用流式细胞术检测槲寄生碱作用后A549细胞周期和凋亡的改变;利用免疫细胞化学染色技术检测槲寄生碱作用后A549细胞PCNA、Caspase-3、MMP-9表达情况;采用TUNEL、AO/EB染色观察槲寄生碱对A549细胞凋亡的影响;通过Boyden小室侵袭实验观察槲寄生碱作用后A549细胞的侵袭状态。在体内实验中,建立荷瘤裸鼠动物模型,观察治疗后裸鼠自然状态、重量并计算肿瘤体积,21d处死裸鼠,肉眼及镜下观察,并通过PCNA、Caspase-3、MMP-9免疫组织化学染色和TUNEL检测观察槲寄生碱对人肺腺癌的增殖、凋亡和侵袭的影响。急性毒性试验评价槲寄生碱对ICR小鼠的毒性,检测LD50。结果:体外实验:(1)槲寄生碱抑制A549细胞的增殖,IC50为0.076mg·mL-1;(2)槲寄生碱将A549细胞大部分阻止在G0/G1期,凋亡率明显升高;(3)槲寄生碱组A549细胞PCNA、MMP-9的表达弱于不加药物组,Caspase-3的表达强于不加药物组;(4) TUNEL、AO/EB染色显示槲寄生碱组A549细胞凋亡率明显高于不加药物组;(5)槲寄生碱穿透人工基底膜的A549细胞的数量、侵袭深度明显少于不加药物组;体内实验:(1)槲寄生碱组裸鼠肿瘤的重量体积均小于未治疗组;(2)槲寄生碱组肿瘤组织PCNA、MMP-9的表达弱于未治疗组,Caspase-3的表达强于未治疗组;急毒实验结果显示槲寄生碱对ICR小鼠LD50为490.09mg·kg-1。结论:1.槲寄生碱在体内、外均可抑制A549细胞增殖、侵袭,诱导凋亡。2.槲寄生碱对ICR小鼠LD50为490.09mg·kg-1。
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