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中药材蒺藜为蒺藜科蒺藜属植物蒺藜（Tribulus terrestris L.）的干燥果实。蒺藜果实中主要含有皂苷、生物碱、黄酮、氨基酸和有机酸等化合物，蒺藜具有平肝解郁、活血、明目、止痒等功效，主要用于头痛眩晕、乳闭乳痛、风疹瘙痒等症。药理研究表明，蒺藜具有抗菌、抗癌、利尿等作用，尤其在防治心脑血管疾病方面有较突出的疗效。本文利用水煎煮、AB-8大孔吸附树脂柱吸附、柱层析（硅胶、ODS）以及制备液相等手段，从蒺藜果实中分离出12种呋甾型皂苷类成分，利用NMR、MS等波谱学手段并结合理化性质鉴定了其中6个化合物的化学结构。本文还建立了蒺藜果中化合物JYH-D即3-O-{[β-D-吡喃木糖基(1→3)][β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)]}-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]-[β-D-吡喃葡萄糖基]-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(R)-5α-呋甾-12-酮-3β,22,26-三醇的HPLC-ELSD含量测定方法，并对蒺藜药材中该化合物的含量进行了测定。一、呋甾型皂苷类化合物的提取、分离、结构鉴定1.1提取将干燥蒺藜果30kg粉碎，用10倍水煎煮，煎煮时间分别为1.5h、1h、0.5h合并提取液，过滤、浓缩、过AB-8大孔吸附树脂柱吸附，用去离子水洗至无色，分别用40%和90%的乙醇溶液洗脱，收集40%乙醇洗脱液，回收乙醇，得到蒺藜总呋甾皂苷280g。1.2分离纯化取蒺藜总呋甾皂苷以乙酸乙酯-乙醇-水（2:1:0.3）为洗脱液进行硅胶柱层析分离，得到1、2、3三个部分。取2部分继续进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯-乙醇-水(5:4:0.5)为流动相进行洗脱，得到4、5两个部分。取5部分进行ODS柱层析，以丙酮-水（1:2～1.2:1）为洗脱液梯度洗脱，共分得Fr-1～Fr-10十个部分。取Fr-3部分用制备液相分离，以16%的乙腈-水溶液为洗脱液洗脱，流速为2ml/min，分得单体F和G，标记为JYH-F和JYH-G。取Fr-4部分用制备液相分离，以18%的乙腈-水为洗脱液洗脱，分得单体B、C、D和Fr-4’,单体分别标记为JYH-B、 JYH-C、 JYH-D。进一步用制备液相分离Fr-4’部分，以17%的乙腈-水为洗脱液洗脱，分得单体K,标记为JYH-K。Fr-5~Fr-10部分，分别以不同比例的丙酮-水为洗脱液反复进行ODS柱层析和以不同比例的乙腈-水为流动相进行制备液相分离，依次得到单体L、A、J、I、H、E，分别标记为：JYH-L、JYH-A、JYH-J、JYH-I、JYH-H和JYH-E。1.3、结构鉴定通过NMR,MS等波谱学手段,结合理化性质并与文献对照，鉴定了其中6个化合物的结构，它们分别为：3-O-{[β-D-吡喃木糖基(1→3)][β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]}[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-[β-D-吡喃半乳糖基]-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(R)-5α-呋甾-12-酮-3β,22,26-三醇（JYH-A）;3-O-{[β-D-吡喃木糖基(1→3)][β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)]}-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]-[β-D-吡喃葡萄糖基]-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(R)-5α-呋甾-12-酮-3β,22,26-三醇（JYH-D）;3-O-{[β-D-吡喃木糖基(1→3)][β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]}[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-[β-D-吡喃半乳糖基]-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(R)-5α-呋甾-3β,-22α-26-三醇，即蒺藜皂苷A(JYH-E);3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]-[β-D-吡喃半乳糖基]-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(S)-5α-呋甾-12-酮-2α，3β，22α，26-四醇(JYH-F);3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]-[β-D-吡喃半乳糖基]-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(R)-5α-呋甾-12-酮-2α，3β，22α，26-四醇(JYH-G);3-O-{[β-D-吡喃木糖基(1→3)][β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)}-[β-D-吡喃葡萄糖基]-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(R)-5α-呋甾-3β,-22α-26-三醇(JYH-J)。以上化合物中JYH-J为新化合物。二、蒺藜果中JYH-D的含量测定2.1仪器、药材及试剂仪器：安捷伦1200型高效液相色谱仪； Alltech2000蒸发光散射检测器；药材：本实验所用的蒺藜果购自安徽亳州，经吉林大学药学院张静敏教授鉴定为蒺藜科植物蒺藜（Tribulus terrestris L.）的干燥果实。试剂：乙腈（色谱纯），二次蒸馏水,其余试剂均为分析纯。2.2方法与结果2.2.1色谱及检测器条件：色谱柱为COSMOSIL C18-MS-II(4.6×250mm，5μm)；以乙腈-水（15.5:84.5~40:60）梯度洗脱；流速1mL.min-1；柱温为25°C；ELSD检测器漂移管温度：104°C，气体（空气）压力2.15bar；放大系数：1；撞击器：关闭。2.2.2线性范围化合物JYH-D在4.00μg～20.00μg之间，对照品峰面积y（logS）与对照品进样量x（logm）呈良好的线性关系。线性方程为y＝1.5170x＋0.2567，R2=0.9994。2.2.3精密度取浓度为0.25mg.mL-1的JYH-D对照品溶液，连续进样6次，测定JYH-D的峰面积，其RSD值为0.51%，说明仪器精密度良好。2.2.4稳定性同一个样品溶液每隔2小时进样一次，计算其峰面积RSD值，在0～10小时内为0.91%，提示样品溶液在10小时内稳定。2.2.5重复性6份样品溶液中JYH-D含量的RSD为0.47%。2.2.6回收率JYH-D的平均回收率为97.02%，RSD=1.05%。以上方法学考察实验结果证明，本方法具有准确度高、精密度高、选择性好等特点。经测定，干燥蒺藜果中化合物JYH-D的平均含量为0.027%。